Взаимоотношения Paramecium bursaria (Ciliophora) с вирусами хлорелл (cem. phycodnaviridae) в трехкомпонентной симбиотической системе Paramecium bursaria - Chlorella sp. - вирус

• Автор: Ященко, Варвара Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.08, 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 168 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНР1Й
1 Введение
2 Цели и задачи
3 Обзор литературы
3.1 Феномен симбиоза Р. bursaria - Chlorella
3.2 Общая характеристика Р. bursaria
3.3 Общая характеристика симбиотических водорослей Chlorella sp
3.4 Систематическое положение симбиотических хлорелл
3.5 Формирование и поддержание симбиоза Р. bursaria - Chlorella
3.6 Координация жизненных циклов хозяина и симбиотических хлорелл
3.7 Специфичность взаимоотношений Р. bursaria- Chlorella
3.8 Общая характеристика вирусов хлорелл
3.9 Филогенетические отношения вирусов хлорелл
3.10 Жизненные циклы вирусов
3.11 Литический цикл вирусов хлорелл Р. bursaria
3.12 Протисты и вирусы
3.13 Поддержание вирусов хлорелл в природных водоемах и в симбиотической системе Р. bursaria - Chlorella
4 Материалы и методы
4.1 Материалы
4.1.1 Клоны Р. bursaria
4.1.2 Клоны Р. caudatum
4.1.3 Штаммы хлорелл
4.1.4 Штаммы вирусов хлорелл
4.2 Методы
4.2.1 Методы культивирования инфузорий

4.2.2 Тестирование клонов Р. bursaria на наличие вирусов и определение титра вирусов
4.2.3 Пульс-Электрофорез
4.2.4 Гибридизация по Саузерну
4.2.5 Антитела и непрямое иммунофлуоресцентное окрашивание
клеток Р. bursaria
4.2.6 Визуализация вирусов при помощи красителей SYTOX
4.2.7 Конфокальная микроскопия
4.2.8 Трансмиссионная электронная микроскопия (ТЭМ)
4.2.9 Метод количественного стереологического анализа
Результаты
5.1 Скрининг клонов Р. bursaria на наличие вирусов
5.2 Обнаружение вирусов в клонах Р. bursaria разных сингенов
5.3 Идентификация вирусов хлорелл в симбиотической системе Р.bursaria - Chlorella методом пульс-электрофореза
5.3.1 Сравнительный анализ ПЭФ-профилей P.bursaiüa и хлорелл
5.3.2 Исследование природы полосы размером около 300 т.п.н
электрокариотипах клонов Р. bursaria
5.3.3 Локализация интегрированной ДНК вируса в симбиотической
системе Р. bursaria — Chlorella — вирус
5.3.4 Локализация неинтегрированной ДНК в симбиотической системе
Р. bursaria - Chlorella - вирус
5.3.5 Оценка количества вирусных геномов
5.4 Исследование локализации вирусных частиц в ассоциации с клеткой Р. bursaria
5.4.1 Идентификация вирусов в трехкомпонентной симбиотической системе Р. bursaria - Chlorella - вирус методом непрямой иммунофлюоресценции

5.4.2 Конфокальная микроскопия клеток P. bursaria окрашенных
красителем SYTOX in vivo
5.4.3 Конфокальная микроскопия клеток P. bursaria in vivo
инкубированных с вирусами, предварительно окрашенными красителем SYTOX
5.5 Исследование вирусов и парамеций методом ТЭМ
5.5.1 Локализация вирусных частиц в симбиотической системе
P. bursaria - Chlorella - вирус
5.5.2 Распределение вирусных частиц на поверхности Р. bursaria
5.5.3 Локализация вирусов в безвирусной системе Р. bursaria
Chlorella
5.5.4 Локализация вирусов в ассоциации с P. caudatum
Обсуждение
6.1 Исследование симбиотической системы Р. bursaria - Chlorella -вирус методом ПЭФ и гибридизации по Саузерну
6.2 Локализация вирусных частиц в симбиотической системе Р. bursaria -Chlorella — вирус
6.3 Специфичность взаимодействия вирусов хлорелл парамеций и Р. bursaria
6.4 Ассоциация вирусных частиц с цилиатурой ротового аппарата Р. bursaria
6.5 Распределение вирусных частиц на поверхности клетки парамеции
6.6 Роль Р. bursaria в системе Р. bursaria - Chlorella - вирус
6.7 Роль вирусов в эволюции и экологии симбиоза Р. bursaria -Chlorella
6.8 Выводы
Приложение
7.1 Приложение 1. Состав сред для поддержания экссисмбиотических хлорелл

3.12 Протесты и вирусы.
Вирусы протестов и взаимоотношения протестов и вирусов сравнительно мало изучены, и долгое время находились на уровне феноменологии. Большая часть исследований посвящена экологической роли вирусов протестов в морских и пресных водоемах (Brussaard, 2004; Wommack, Colwell, 2000). Эту область в области медицинской микробиологии можно назвать новой и активно развивающейся (Vanchini, Benchimol, 2005; Benchimol et al., 2002).
Группа исследователей из Таллинна исследовала возможность размножения вирусов, патогенных для человека, в разных группах протестов, в том числе и в парамециях. Подробно серия этих работ освещена в обзоре о формах взаимоотношений протестов с вирусами (Терас, 1981). Наличие вирусов внутри клеток после длительного инкубирования инфузорий с вирусами разных типов регистрировали методом непрямой иммунофлюоресценции. Оказалось, что родственные виды парамеций реагировали на контакт с вирусами по-разному. В Р. multimicronucleatiim вирусы обнаружены не были, у Р. jennigsi и Р. aurelia была установлена вирусоспецифическая иммунофлюоресценция по отношению к аденовирусу Adeno-З, у Р. Caudatum также по отношению к Adeno-З и к вирусам Coxsackie В-3 и В-5, вызывающим у человека вирусный миокардит. Эти же три вируса поддерживались в эксперименте в клетках Tetrahymena pyriformis (Терас, Кеса, 1981 а, б). Также исследовали вопрос о том, происходит ли мультипликация вирусов в инфузориях или лишь поддержание. Результаты однозначно показали, что титр вируса после инкубации в инфузорииях значительно увеличивался, а это означало, что вирусы успешно мультиплицируются, персистиругот и сохраняют инфекционность в клетках цилиат. Авторы предположили, что у инфузорий возникала латентная вирусная инфекция.