Взаимодействие чумного микроба и его антигенов с клетками крови человека in vitro

• Автор: Шмелькова, Татьяна Петровна
• Шифр специальности: 03.00.07, 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 157 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1 РОЛЬ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЧУМНОГО МИКРОБА С КЛЕТКАМИ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ ОРГАНИЗМА ХОЗЯИНА В ПРОЯВЛЕНИИ МЕХАНИЗМОВ ЕГО ВИРУЛЕНТНОСТИ И ЦИТОТОКСИЧНОСТИ
Глава 2 НОВЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ В ИЗУЧЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ И ДРУГИХ ФАКУЛЬТАТИВНЫХ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ПАРАЗИТОВ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ МЕТОДОВ ПРОТОЧНО-ЦИТОФЛУОРИМЕТРИЧЕСКОГО АНАЛИЗА 33 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава 3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ЗЛ Материалы
3 Л Л Штаммы микроорганизмов
3 Л .2 Антигены и препараты
ЗЛ.З Флуоресцирующие красители
3 Л .4 Цитофлуориметрическое оборудование
3.2 Микробиологические методы
3.2.1 Выращивание бактерий на питательных средах и приготовление бактериальных взвесей
3.2.2 Определение жизнеспособности бактерий, оценка интенсивности
их размножения или гибели в образцах цельной крови человека
3.2.3 Световая, люминесцентная и электронная микроскопия бактерий
3.2.4 Электрофоретический метод исследования белков Yersinia pestis
3.2.5 Оценка неоднородности культур Y. pestis по содержанию на клетку ДНК, белка и специфических поверхностных антигенов
3.3 Иммунологические методы
3.3.1 Взятие крови, выделение лейкоцитов и инактивация сывороточного комплемента в крови
3.3.2 Определение абсолютного и относительного содержания лейкоцитов

3.3.3 Люминесцентная микроскопия и морфологический анализ лейкоцитов
3.3.4 Получение распределений лейкоцитов крови по фазам клеточного цикла
3.3.5 Оценка состояния (структуры) ядерного хроматина лейкоцитов
3.3.6 Определение содержания в фагоцитах, бактерицидных гранул с эластазной и миелопероксидазной активностью. Оценка in vitro интенсивности дегрануляции клеток врожденного иммунитета
3.3.7 Определение фагоцитарной активности лейкоцитов и оценка их гибели in vitro по типу апоптоза
3.4 Методы учета и представления результатов цитофлуоримстрического анализа
3.5 Статистические методы
Глава 4 ХАРАКТЕРИСТИКА КЛЕТОК В КУЛЬТУРАХ Y. PESTIS, ВЫРАЩЕННЫХ ПРИ ТЕМПЕРАТУРАХ 28 ° и 37 °С
4.1 Активация процессов синтеза ДНК, белка и специфических
поверхностных антигенов в клетках Y. pestis EV НИИЭГ, растущих на жидкой питательной среде при температуре 37 °С
4.2 Особенности распределений чумных микробов по клеточному циклу в культу рах вирулентного и авирулентного штаммов Y. pestis
Глава 5 РАЗРАБОТКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ IN VITRO АНТИФАГОЦИТАРНЫХ И ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЧУМНОГО МИКРОБА
5.1 Сохранение стабильности состояния ядерного хроматина и
бактерицидных гранул лейкоцитов в процессе длительной инкубации образцов цельной крови человека
5.2 Сравнительное исследование антифагоцитарных и цитотоксических свойств клеток Y. pestis EV НИИЭГ, выращенных при температурах 28 0 и 37 °С
5.3 Эффект сывороточных опсонинов на фагоцитарную активность
клеток врожденного иммунитета и интенсивность их повреждения in vitro чумными микробами

5.4 Изучение особенностей развития апоптоза лейкоцитов крови человека под влиянием клеток высоковирулентного и авирулентного штаммов чумного микроба
Глава 6 ВЛИЯНИЕ ПРОТИВОЧУМНОЙ ВАКЦИНАЦИИ НА ФУНКЦИОНАЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ И ИНТЕНСИВНОСТЬ
ПОВРЕЖДЕНИЯ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА ПРИ
ВЗАИМОДЕЙСТВИИ IN VITRO С КЛЕТКАМИ И АНТИГЕНАМИ
Y. PESTIS
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

статистической выборке отдельных клеток, можно получить представление об их долевом распределении по фазам клеточного цикла [Crissman H.A., Tobey R.A., 1974; Barlogie В. et al., 1976; Kruth H.S., 1982].
Практическая значимость контроля за соотношением клеточных элементов на разных стадиях митотического цикла и возможность очень быстрого определения этого соотношения с помощью проточной цитофлуориметрии (от 2 мин до 20 мин с момента выделения клеток - в зависимости от цитохимического метода окраски), послужили мощным стимулом для широкого использования цитометрии в клинической онкологии и гематологии, а также для изучения характера воздействия радиоактивного излучения, митогенов и цитостагиков на клеточную пролиферацию [Исаков В.Л. с соавт., 1988; Smets L.A. et ab, 1976; Muirhead K.A. et ab, 1985].
Анализируя профили распределения клеток по фазам митотического цикла, исследователи давно заметили на ДНК-гистограммах область (слева от диплоидного пика G]/G0), где учитываются более слабые сигналы, соответствующие клеткам с содержанием ДНК меньшим, чем в зрелых диплоидных лейкоцитах (менее 2С ДНК). Однако большинство исследователей не придавало значения данному феномену, рассматривая его в качестве артефакта, связанного с регистрацией сигналов от субклеточных структур, таких как обломки клеток и фрагменты клеточных ядер. В последующем было экспериментально доказано, что это клетки, находящиеся на стадии гибели по типу апоптоза в ответ на физиологический сигнал или повреждающее воздействие, несовместимое с компенсаторными возможностями клеточного гомеостаза [Козинец Г.И., Макаров В .А., 1998].
Такие клетки в большом количестве были обнаружены в культурах перитонеальных макрофагов морских свинок при изучении методом проточной цитофлуориметрии фагоцитоза вирулентного штамма чумного микроба. Они фактически отсутствовали в опытах с вакцинным штаммом EV НИИЭГ чумного микроба и были идентифицированы как погибшие или поврежденные макрофаги [Кравцов A.JI. с соавт., 1994]. В этих исследованиях, в которых впервые был сделан вывод о возможности использования проточной цитофлуориметрии для изучения повреждающего эффекта чумного микроба на клетки иммунной системы организма