Выделение, идентификация и характеристика изолятов вирусов инфекционного бронхита кур и инфекционного ларинготрахеита птиц

• Автор: Батченко, Галина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 156 с. : ил.

3 СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Инфекционный бронхит кур (ИБК)
2.1.1. Патогенез и эпизоотология инфекционного бронхита кур
2.1.2. Классификация и структура возбудителя
2.1.3.Антигенная вариабельность вируса ИБК
2.1.4 Антигенные свойства пепломерного белка Б1
2.1.5. Характеристика изолятов вируса ИБК, выделенных на
птицефабриках России
2.2. Инфекционный ларинготрахеит птиц
2.2.1. Патогенез и эпизоотология инфекционного ларинготрахеита
птиц
2.2.2. Классификация и физико-химические свойства вируса ИЛТ
2.2.3. Репликация вируса инфекционного ларинготрахеита
2.2.4. Диагностика инфекционного ларинготрахеита птиц
2.2.5. Дифференциация вакцинных штаммов ИЛТ и полевых
изолятов
2.3.3аключение по обзору литературы
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы
3.1.1. Вирус ИБК
3.1.2. Вирус ИЛТ
3.1.3. Химические реагенты
3.1.4. Ферменты
3.1.5. Праймеры
3.1.6. Оборудование

3.2. Методы
3.2.1. Очистка и концентрирование вируса ИБК
3.2.2. Очистка и концентрирование вируса ИЛТ
3.2.3. Титрование вирусов ИБК и ИЛТ
3.2.4. Контроль вируссодержащего сырья на отсутствие контаминации бактериальной и грибной микрофлорой
3.2.5. Контроль вируссодержащего материала на отсутствие контаминации микоплазмами
3.2.6. Непрямой вариант ИФА
3.2.7. Блокирующий вариант ИФА
3.2.8. Выделение суммарной ДНК и РНК
3.2.9. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
3.2.10. Прямое секвенирование амплифицированных
фрагментов кДНК
3.2.11. Компьютерный анализ первичных структур нуклеиновых
кислот
3.2.12. Получение гипериммунных сывороток
3.2.13. Реакция нейтрализации
3.2.14. РДП для выявления вируса ИЛТ
3.2.15. Статистическая обработка полученных результатов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И
ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Определение видовой принадлежности и выделение изолятов
вируса ИБК «Калужский» и «Таганрогский» из полевых
проб
4.2. Изучение антигенных свойств выделенных изолятов вируса ИБК в реакции перекрестной нейтрализации

4.3. Изучение способности выделенных изолятов ИБК
к репродукции в КЭ
4.4. Определение вирулентности выделенных изолятов вируса ИБК 91 (• 4.5. Определение антигенной активности изолятов вируса ИБК
4.6. Индикация генома вируса ИЛТ с помощью амплификации фрагмента кДНК области генов ТК и ЮР4
4.7. Секвенирование амплифицированных участков генов 1СР4 и ТК вируса ИЛТ и анализ генетической вариабельности
4.8. Выделение вируса ИЛТ из полевых проб
4.9. Идентификация выделенных вирусов средствами электронной
* микроскопии, в реакциях нейтрализации, РДП и ИФА
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ

низковирулентных и вакцинных как при исследовании ПЦР-продуктов, полученных на ген ТК, так и на gG. Однако различий низковирулентных штаммов от вакцинных не наблюдали по обоим генам.
Leib D.A и сотр. (130) с помощью рестрикционного анализа исследовали ДНК 11 изолятов вируса инфекционного ларинготрахеита: 8 изолятов были выделены от больных птиц в Англии в течение 1979 - 1984 гг., 1 изолят выделен на Кипре и 2, в том числе 1 вакцинный, получены из Америки. Для расщепления использовали 3 специфичных фермента: Крп1, ВатН1 и Hind3. Полученные фрагменты ДНК подвергали электрофорезу. Фермент Крп1 расщеплял ДНК европейских вирусов на одинаковые по электрофоретической подвижности участки, тогда как штаммы американского происхождения давали несколько отличные фрагменты как от европейских штаммов, так и друг от друга, хотя в последнем случае различия были незначительными. Расщепление ДНК с помощью фермента ХатН1 показало идентичность всех европейских штаммов и 1 американского (вакцинного), у второго штамма установлены 2 дополнительных фрагмента. Расщепление ДНК с помощью фермента Hind3 не выявило различий по размерам рестрикционных фрагментов между всеми 11 исследованными штаммами вируса инфекционного
ларинготрахеита.
Рядом зарубежных авторов была показана возможность
использования реакции гибридизации для дифференциации вакцинных штаммов от полевых (123, 147). Полученные с помощью ПЦР фрагменты ДНК вируса ИЛТ клонировали в различные векторные системы для дальнейшего использования их в качестве меченного зонда в реакции гибридизации. В результате удавалось различать вирулентные штаммы от авирулентных, а также была предложена система для дифференциации вируса ИЛТ от других герпесвирусов (HCV, вируса болезни Марека) (147).
Chang P.-С. с сотр. (73) обнаружили в инвертированных терминальных повторах геномной ДНК вируса инфекционного
ларинготрахеита гомополимерный фрагмент, состоящий из различного