Изучение структурных белков вируса бешенства

• Автор: Кротова, Лариса Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1985
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 152 c. : ил

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
ВИРУСА ВЕЗИКУЛЯРНОГО СТОМАТИТА КАК ТИПИЧНОГО ПРЕДСТАВИТЕЛЯ СЕМЕЙСТВА ШАВБОУИИБАЕ
1. Структура генома вируса везикулярного стоматита
2. Строение и состав вириона везикулярного стоматита
3. Транскрипция и репликация
4. Синтез вирусных белков
Глава II. СТРУКТУРА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА
БЕШЕНСТВА
1. Морфология вириона бешенства
2. Физические характеристики и химический состав вируса бешенства
3. Антигенный состав вируса бешенства
Глава III. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ВИРУСА БЕШЕНСТВА С ЧУВСТВИТЕЛЬНЫМИ КЛЕТКАМИ
1. Транскрипция и репликация генома
2. Синтез вирусных белков
ГЛАВА ІУ.ИСТОРИЯ ПОЛУЧЕНИЯ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА БЕШЕНСТВА ШТАММ "ВНУКОВО-32"
ЧАСТЬ П. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава V. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Реактивы и радиоактивные изотопы
2. Буферные растворы
3. Вирус, очистка, концентрирование и выделение его компонентов
а) Клетки, их заражение и мечение
б) Приготовление препарата вируса, используемого
для изучения процесса гель-фильтрации
в) Получение вирусных компонентов

4. Получение цитоплазматических экстрактов и
анализ их структур
5. Фракционирование градиентов
6. Электрофорез белков в полиакриламидном геле
7. Сканирование окрашенных гелей
8. Авторадиография
9. Сканирование вирусных ^С-белков
10. Пептидное картирование
11. Определение радиоактивности
12. Титрование инфекционного вируса на животных
13. Оценка иммуногенной активности инантивирован-
■ ыого вируса
14. Определение содержания белка в вирусных препаратах
15. Гель-фильтрационная хроматография на макропористых кремнеземах
16. Электронная микроскопия
17. Статистическая обработка результатов
Глава V1. ХАРАКТЕРИСТИКА ВИРУСА БЕШЕНСТВА НА ДВУХ ПАССАЖНЫХ УРОВНЯХ
Глава VП. ПОЛУЧЕНИЕ ОЧИЩЕННЫХ КОНЦЕНТРАТОВ ВИРУСА
1. Изучение эффективности и параметров очистки вируса бешенства с помощью гель-фильтрации на модифицированных винилпирролидоном макропористых кремнеземах
2. Очистка и концентрирование вируса с помощью центрифугирования
Глава VШ. ИНДИКАЦИЯ СТРУКТУРНЫХ БЕЛКОВ ВИРУСНЫХ ЧАСТИЦ,
' ОЦЕНКА ИХ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАСС И МОЛЯРНЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ
1. Плавучая плотность вирионов бешенства
2. Молекулярные массы отдельных структурных белков
ГЛАВА IX. ИЗУЧЕНИЕ ЛОКАЛИЗАЦИИ БЕЛКОВ В ВИРУСНЫХ ЧАСТИЦАХ
1. Анализ результатов депротеинизирующих воздействий
2. Анализ набора и поступления белков во внутриклеточных нуклеокапсндах

а) Условия мечения
б) Морфология нуклеокапсидов
в) Выделение нуклеокапсидов с определением набора белков
г) Кинетика поступления
ГЛАВА X. ПРЕПАРАТИВНОЕ ПОЛУЧЕНИЕ БЕЛКА G ВИРУСА БЕШЕНСТВА
1. Действие НР-40 на вирусные частицы
2. Выделение структурных белков в препаративных количествах
ОБЩЕЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

15.000 об/мин и 4°С в течение 18 часов в роторе ОТ-27 центрифуги Ь5.50 . Иногда материал наслаивали на градиент концентрации сахарозы 20-60% на тяжелой воде. Сверху на градиент наслаивали I мл слой 10%-ной сахарозы с 0,5% нр-40 . После центрифугирования материал верхней части градиента (фракция субвирус-ных частиц) собирали и анализировали с помощью электрофореза в полиакриламидном геле (ПАГ).
В некоторых случаях смесь после инкубации с ИР-40 осаждали через 20%-ную сахарозу в течение двух часов при 35.000 об/мин в роторе 21-50 центрифуги 1,5.50 . Полученные осадки суспендировали в 0,1 мл НТ-буфера и эти препараты использовали для электронной микроскопии.
"Пульс-чейз" анализ. В некоторых опытах для изучения вирус-специфических белков нуклеокапсидов применяли метод "пульс-чейз" анализа.
Зараженные клетки инкубировали в растворе Эрла, содержащего ^С-гидролизат белка хлореллы (50 мкКи/мл) в течение определенного периода времени (20 минут) - "пульс". Далее инкубацию проводили в условиях "чейза", при которых включение меченых аминокислот в клеточные структуры прекращается. При этом одну часть проб сразу же после "пульса" помещали в ледяную баню, залив холодным раствором Игла под горло, а в другой - клетки предварительно промывали три раза теплой питательной средой, нагретой до 37°С и затем инкубировали в свежем растворе в течение определенного периода времени.
4. Получение цитоплазматических экстрактов и анализ их структур
После удаления культуральной жидкости, зараженный клеточный слой промывали свежей культуральной средой, охлажденной до 4°С и клетки снимали с поверхности стекла механически в небольшом объ-