Протеолиз запасных белков в прорастающих семенах бобовых

• Автор: Шутов, Андрей Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 1982
• Место защиты: Кишинев
• Количество страниц: 397 c. : ил

1. Введение
2. Обзор литератур!
2.1. Запасные белки семян двудольных растений
2.1.1. Легуминоподобные 11S белки
2.1.2. Вицилиноподобные 7S белки
2.1.3. Полиморфизм легумино- и вицилиноподобных белков
2.1.4. Другие запасные белки семян двудольных растений
2.1.5. Запасные белки семян вики
2.1.6. Запасные белки семян злаков
2.2. Протеолитические ферменты семян
2.2.1. Множественность протеаз в семенах
2.2.2. Протеазы семян, локализованные в алейроновых
зернах
2.2.3. Изменение активности протеаз семян при
прорастании
2.2.4. Протеазы семян, гидролизующие низкомолекулярные синтетические субстраты
2.2.5. Действие протеаз покоящихся семян на запасные
белки
2.2.6. Регуляция протеолитической активности
в прорастающих семенах
2.2.6.1. Синтез de novo протеаз в прорастающих семенах
2.2.6.2. Ингибиторы протеаз в семенах
2.2.6.3. Модификация запасных белков при прорастании
семян
2.2.7. 0 значении структуры запасных белков семян
двудольных растений

Материалы и методы исследования Материалы
Растительный материал Запасные белки
Выделение легумина и вицилина вики зонным
изоэлектричееким осаждением на сефадексе
Выделение 11S б ежа сои
Запасные бежи семян других растений
Другие материалы
Методы исследования
Определение активности ферментов
Определение протеолитической активности
с помощью тринитробензолсульфокислоты
Другие методы определения активности ферментов
Определение белка
Определение N—концевых аминокислот в бежах, разделенных электрофорезом в полиакриламидном геле
Другие методы исследования
Исследование протеаз семян вики, гидролизующих
экзогенные субстраты
Бензоил-D, Ь-аргинин-п-нитроанилидаза (БАЛА-аза)
семян вики
БАЛА-аза семядолей
Очистка БАПА-азы семядолей
Некоторые свойства БАПА-азы семядолей
БАЛА-аза проростков
Очистка БАПА-азы проростков
Сходство БАПА-аз из семядолей и проростков

4.1.2.3. Некоторые свойства БАПА-азы проростков
4.1.3. Итоги исследования БАПА-азы семян вики и других
растений
4.2. Эстераза семян вики, гидролизующая п-нитрофениловый эфир карбобензокси-ь-аланина (эстераза А)
5. Действие пищеварительных протеаз на запасные
белки семян некоторых бобовых растений
5.1. Материал и методы исследования
5.2. Гидролиз запасных белков трипсином и химотрипсином
5.3. Гидролиз запасных белков пепсином
5.4. Итоги исследования гидролизуемости запасных
белков бобовых растений
6. Идентификация и исследование протеаз семян вики, участвующих в мобилизации запасных белков
6.1. Действие протеаз семян вики на нативные запасные белки: идентификация протеазы А
6.2. Действие протеаз семян вики на модифицированные
при прорастании запасные белки: идентификация протеаз В, С и в
6.3. Протеаза А
6.3.1. Очистка протеазы А
6.3.2. Некоторые свойства протеазы А
6.3.3. Ферменты, аналогичные протеазе А вики, в семенах других растений
6.3.4. 0 методах выделения протеазы А вики и аналогичных ферментов маша и кукурузы
6.4. Протеаза В: очистка и некоторые свойства
6.5. Протеаза С

целлюлозу, связывающие ингибитор трипсина. На основании этих наблюдений автор пришел к выводу о действии ингибитора трипсина на эндогенную протеолитическую активность и высказал предположение о том, что в покоящихся семенах ЗБ защищены от действия собственных протеаз, поскольку последние находятся в неактивной (связанной с ингибитором трипсина) форме; в прорастающих семенах удаление ингибитора трипсина из эндосперма активирует протеазы, следствием чего и является распад ЗБ.
Однако, обнаруженная Полановским /428/ ингибиторная активность в семенах ржи способна подавить лишь ~25$ (рассчитано по данным автора) казеиназной активности, что не согласуется ни с отсутствием (по данным Полановского) последней в нефракционированном экстракте, ни с высоким содержанием ингибитора трипсина в семенах ржи. В цитированных выше работах /428,473,496/ очистка ингибитора трипсина не проводилась, и поэтому весьма вероятно, что полученные результаты обусловлены присутствием в исследованных сырых препаратах активности специфических ингибиторов эцдогенных протеаз. Таким образом, вывод об участии ингибиторов экзогенных протеаз в регуляции метаболизма белков в семенах нельзя считать экспериментально обоснованным.
Микола и Энари /393/ обнаружили в семенах ячменя ингибиторы эндогенных протеаз, содержащиеся в 100-200 раз меньшем количестве, чем ингибиторы трипсина, химотрипсина и микробных протеаз. 0 присутствии в семенах ингибиторов эндогенных протеаз могут свидетельствовать результаты ряда работ /167,266,314,527/, в которых наблюдалось значительное увеличение активности протеаз после их частичной хроматогра-