Функциональные свойства и закономерности структурной организации гистидиндекарбоксилазы и каталазы из Micrococcus sp. n.

• Автор: Романцев, Федор Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 174 c. : ил

Глава I. Гистидиндекарбоксилаза и каталаза (обзор лите-! ратуры)
jl.I. Гистидиндекарбоксилаза
Гистидин и гистамин
I.I.2. Кофакторы и субстратная специфичность гистидин-■ декарбоксилазы
: I.I.3. Выделение и очиотка гистидиндекарбоксилаз
1 I.I.4. Структура и свойства гистидиндекарбоксилаз
' 1.2. Каталаза
1.2.1. Выделение и очистка каталазы
»1.2.2. Структура и свойства каталаз
* ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава II. Методы исследования
‘ П.1. Микробиологический материал
' П.1.1. Условия выращивания
П.2. Определение активности гистидиндекарбоксилазы
П.2.1. Измерение активности гистидиндекарбоксидазы манометрическим методом
П.2.2. Измерение активности гистидиндекарбоксидазы после высоковольтного электрофореза
П.2.3. Определение активности гис тидиндекар.б оксила зы
после электрофореза в полиакриламидном геде
П.З. Определение активности каталазы
П.З.Г. Спектрофотометрическое определение каталазной
активности
П.3.2. Манометрическое определение активности каталазы
П.3.3. Визуализация зон, обладающих активностью каталазы после электрофореза в полиакриламидном геле
П.4. Определение активности гистидин аммиак-лиазы
П.5. Определение активности гистаминазы
П.6. Выделение гистидиндекарбоксилазы (схема X)
П.6.1. Анализ чистоты препаратов гистидиндекарбоксилазы
П.7. Электрофорез нативных белков в полиакриламидном
геле
П.8. Электрофорез в полиакриламидном геле диссоциированных препаратов белков
П.9. Гель-фильтрация
П. 10. Анализ аминокислотного состава
П.П. Определение N-конце в ой последовательности
аминокислот
П. 12. Спектрофотометрировакие белковых растворов
Глава III. Результаты исследований
Ш.1. Влияние условий выращивания на активность гистидиндекарбоксилазы и каталазы
Ш.1.Х. Множественные формы ферментов каталазы и гистидиндекарбоксилазы
Ш.1.2. Выделение гистидиндекарбоксилазы и каталазы,
фиксированных на клеточной матрице
Ш.1.3. Свойства гистидиндекарбоксилазы и каталазы,
фиксированных на клеточной матрице ..."
Ш.2. Испытание модификаций схемы выделения и очистки
водорастворимой гистидиндекарбоксилазы
Ш.З. Выделение каталаз
Ш.3.1. Физико-химическая характеристика каталаз
Ш.4. Протеолитическая устойчивость каталаз и гистидиндекарбоксилазы
.Ш.5. Термостабильность гистидиндекарбоксилазы и каталазы.П2
Ш.6. Инактивация гистидиндекарбоксилазы субстратом
каталазы; действие гистидина и гистамина на ката-лазу

Гдава U. Обсуждение результатов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДУ:
СПИСОК "ЛИТЕРАТУРЫ. .

логарифмической фазе роста и возрастает в период перехода в стационарную фазу. Как правило, повышение активности фермента синхронизировано с закислением питательной среды. Количество каталазы возрастает при внесении в питательную среду перекиси водорода в концентрации от I мкМ до 2 мМ; максимальное стимулирование отмечается 80 мкМ концентрацией HgOg /1X4/. Накопление-каталазы у Acanthamaeba castellanii также как И у Salmonella typhimurium носит дискретный характер и имеет первый максимум через 45 часов роста. Позторное резкое увеличение активности происходит в стационарной фазе роста /107,108/. Увеличение активности фермента В 10 раз В клетках Escherichia coli ПРОИСХОДИТ только в случае, если наряду с субстратом фермента питательная среда обогащена дрожжевым экстрактом /143/, что свидетельствует о реализации механизмов катаболической репрессии при действии дрожжевых экстрактов на индукцию каталазы. Регистрируемая активность каталазы Bacillus mesentericus, Spirulina platensis, Rhodopseudomonas capsulata, Pseudomonas putida, Azoto bacter, Citrobacter зависит от возраста культуры и многих условий культивирования /34,67,129/; определяющим параметром является степень аэрирования культуры. Исследование путей биосинтеза каталазы У Saccharomyces cerevisiae /83,Х44,Х68/ обнаружило корреляцию изменения активности фермента в соответствии с различными фазами спсруляции микроорганизма и в зависимости от rho -фактора /188/. Установлено, что биосинтез каталазы снижен при культивировании в анаэробных условиях, в присутствии глюкозы и полностью подавляется цикдогексимидом /144/.
Обнаружена сложная взаимосвязь в изменениях активности каталазы г. трпптофаноксигеназы, 5-окситриптофандекарбоксилазы, цитохром С оксидазы, сукцинэтдегидрогенэзы, щелочной фосфзтазы,