Изучение структуры и принципа работы митохондриальной трансгидрогеназы

• Автор: Сабурова, Лариса Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 138 c. : ил

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Структура и свойства трансгидрогеназ
1. Физико-химические свойства трансгидрогеназы
2. Стереохимия трансгидрогеназной реакции
3. Субстратная специфичность пиридиннуклеотидтранс-гидрогеназы
4. Обратимые ингибиторы трансгидрогеназной реакции
5. Кинетика трансгидрогеназной реакции
6. Механизм сопряжения трансгидрогеназной реакции с процессом преобразования энергии
7. Стехиометрия транслокации протонов трансгидрогеназой;33
8. Регуляция трансгидрогеназной реакции электрохимическим потенциалом ионов водорода
9. Функциональные группы пиридиннуклеотидтрансгидро-геназы
10. Парциальные реакции
11. Физиологическая роль пиридиннуклеотидтрансгид-рогеназы
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Выделение митохондрий из сердца быка
2. Получение субмитохондриальных частиц
3. Выделение митохондрий из мечени крысы
4. Получение субмитохондриальных частиц из митохондрий печени крысы

5. Определение трансгидрогеназной активности в субмитохондриальных частицах
6. Модификация митохондриальной трансгидрогеназы
-хлормеркурибензоатом (ПХМБ)
7. Обработка митохондрий цистеином
8. Обработка субмитохондриальных частиц цистеином
9. Синтез арильных производных кофермента А (КоА) и дефосфо-кофермента А (дфКоА)
а) Синтез э -7-нитробензофуразан-4ильного производного КоА (НБФ-КоА)
б) Синтез Б -7-нитробензофуразан-4ильного производного дфКоА
в) Синтез б -2,4-динитрофенильного производного КоА
г) Синтез б-2,4-динитрофенильного производного дфКоА
10. Модификация митохондриальной трансгидрогеназы пири-доксаль-5’-фосфатом
11. Определение концентрации белка
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1. Выяснение роли сульфгидрильных групп трансгидрогеназы, расположенных на внешней стороне внутреней мембраны митохондрий в активности фермента
2. Взаимодействие трансгидрогеназы с арильными производными КоА и дфКоА
а) Синтез и свойства арильных производных КоА и дфКоА
б) Ингибирование арильными производными КоА митохондриальной трансгидрогеназы
3. Взаимодействие трансгидрогеназы с пиридоксаль-5*-фосфатом

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

10. Парциальные реакции
Все до сих пор полученные данные не позволяют предпочесть какой-либо из предложенных механизмов функционирования трансгидро-геназы - "петли" или "помпы". Однако, данные по изучению парциальных реакций трансгидрогеназы дают некоторые указания на то, что трансгидрогеназная реакция протекает с образованием восстановленного интермедиата.
Если перенос гидрид-иона от восстановленного субстрата к окисленному происходит через образование восстановленного фермента-интермедиата, то возможно, что такой фермент способен катализировать окисление одного из восстановленных субстратов искусственным акцептором электронов. В лаборатории Эрнстера было показано, что субмитохондриальные частицы из сердца быка катализируют окисление НАД® 2,6-дихлорфенолиндофеколом (ДХФЙФ) /105/. Причем, в реакцию вовлекается водород, находящийся в 4В-положении НАД®, что соответствует стереоспецифичности трансгидрогеназной реакции. Реакция
подавляется ингибиторами трансгидрогеназы - % и АДФ. Авторы
предположили, что НАД®-ДХФИЗ>-реду ктазная реакция является парциальной реакцией трансгидрогеназы. Однако, очищенный фермент этой реакции не катализирует /105/. По-видимому, либо окисление ДХШш за счет НАД® протекает не в ходе трансгидрогеназной реакции, либо при очистке фермента происходят такие изменения его свойств (или состава), что фермент теряет НАДФН-ДКФИш-редуктазную активность.
Ридстрем и др. /21/ показали, что субмитохондриальные частицы катализируют реакцию восстановления Г14с]нАДФ+ за счет НАД®, но эта реакция обладает низкой активностью и не зависит от энергизации мембраны. В отличие от НАД®—ЧіАД+ трансгидрогеназноі
активности, НАД® *-НАДФ+ реакция не ингибировалась трипсином.
Авторы сделали вывод, что обнаруженная ими активность не принадле-