Биохимические и иммунологические механизмы нарушений при злокачественных лимфомах кожи

• Автор: Савватеева, Мария Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 118 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА I. Обзор литературы
1.1. Этиология, патогенез и классификация злокачественных лимфом кожи.
1.2. Ферменты нуклеинового обмена и их роль в дифференцировке и пролиферации Т клеток.
1.3. Роль иммунологических маркеров и цитокинов в норме и при опухолевом росте.
1.3.1. Участие цитокинов в процессах воспаления в норме и при злокачественных лимфомах кожи.
1.3.2. Значение синтеза основных популяций цитокинов Т хелперами обоих классов при злокачественных лимфомах кожи.
1.3.3. Ростовые факторы при злокачественных лимфомах кожи.
1.4. Роль Т клеточных рецепторов в патогенезе злокачественных лимфомах кожи.
1.5. Заключение
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Условия получения биологического материала
2.2. Выделение лимфоцитов из периферической крови.
2.3. Определение активности пуриннуклеозидфосфорилазы (ПНФ) и аденозиндезаминазы (АДА) в различных биологических объектах.
2.4. Иммуноферментяые методы исследования
2.5. Определение нарушений перестройки у-цепи Т клеточного рецептора.
2.5.1. Бактериальные штаммы, клеточные культуры и плазмидные
векторы.
2.5.2. Реактивы.
2.5.3. Выделение геномной ДНК.
2.5.4. Трансформация клеток Е.соїі плазмидной ДНК.
2.5.5. Выделение и очистка плазмидной ДНК.
2.5.6. Электрофорез ДНК в агарозном геле и элюция фрагментов ДНК из легкоплавкой агарозы.
2.5.7. Электрофорез ДНК в ПААТ
2.5.8. Электрофорез ДНК в ПАА-агарозном геле.
2.5.9. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
2.5.10. Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей.
2.5.11. Анализ моноклональности у-цепи Т клеточного рецептора.
2.5.12. Клонирование ПНР продуктов.
2.5.13. Окраска и визуализация результатов электрофореза ПАА-агароза.
2.5.14. Культивирование суспензионных клеточных линий.
2.6. Статистическая обработка результатов.
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 3. Анализ активности ферментов нуклеинового обмена в разных тканях при злокачественных лимфомах кожи.
3.1. Оценка активности аденозиндезаминазы в сыворотке крови, эритроцитах, гомогенатах кожи и лимфоцитах периферической крови в норме и при злокачественных лимфомах кожи.
3.2. Оценка активности пуриннуклеозидфосфорилазы в сыворотке крови, эритроцитах, коже и лимфоцитах периферической крови в норме и при злокачественных лимфомах кожи.
3.3. Сравнение активности ферментов нуклеинового обмена при злокачественных лимфомах кожи.

ГЛАВА 4. Сравнительный анализ концентрации цитокинов и факторов роста в норме и при злокачественных лимфомах кожи.
4.1. Концентрация провоспалительных цитокинов в норме и на различных стадиях злокачественной лимфомы кожи.
4.2. Уровень ростовых факторов у здоровых лиц и при Т клеточной лимфоме кожи.
4.3. Соотношение уровня концентраций ИЛ2 и ИЛ4 в сыворотке крови и лимфоцитах периферической крови.
ГЛАВА 5. Изучение нарушений геномной перестройки у цепи Т клеточного рецептора при злокачественных лимфомах кожи.
5.1. Анализ геномных перестроек вариабельного района у-цепи Т клеточного рецептора.
5.1.1. Метод анализа конформационного полиморфизма одноцепочечных фрагментов ДНК для оценки моноклональной популяции Т клеток при ЗЛК и его чувствительность.
5.1.2. Распределение нарушений перестройки у цепи ТкР в лимфоцитах периферической крови и биоптатах кожи при злокачественных лимфомах кожи.
5.2. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей моноклональных популяций ТкР в лимфоцитах периферической крови и биоптатах кожи при ЗЛК.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
ЛИТЕРАТУРА

Эпидермальный ростовой фактор (ЭФР), белок, размером 53 кДа, стимулирующий рост колоний кератиноцитов in vivo, он присутствует во всех биологических жидкостях и тканях организма [Carpenter, Cohen, 1979]. ЭФР связывается с клеточным рецептором, являющимся гликопротеином, состоящим из 1186 аминокислот, и имеющим несколько функциональных доменов [Stoscheck, King, 1986].
Рецептор обладает тирозинкиназной активностью, которая способна к аутофосфорилированию [Hackel P.O., 1999; Moghal N., Sternberg P. W., 1999]. Активированный ЭФР рецептор также
фосфорилирует другие клеточные белки на тирозиновых остатках, переводя внешний клеточный сигнал в сигнал, регулирующий клеточную пролиферацию и дифференцировку. Все действие ЭФР на интактные клетки вызывается путем фосфорилирования на тирозине киназы ЭФР рецептора. Мутационный анализ ЭФР рецептора показал, что киназная активность рецептора является существенной для того, чтобы ЭФР увеличивал внутриклеточный уровень Са, а также вызывал синтез ДНК [Honegger et al.,1987; Moolenar et al.,1988].
В нормальной человеческой коже ЭФР рецепторы были найдены в высокой концентрации в базальных кератиноцитах и их число уменьшалось по мере дифференцировки кератиноцитов в роговой слой. Преимущественная локализация ЭФР рецепторов в базальных кератиноцитах подтверждает предположение, что этот рецептор присутствует в быстро обновляющейся клеточной популяции, но высокая концентрация ЭФР рецептора отмечалась и в слабо размножающихся клетках с активным ионным транспортом [Elder, 1995].
Было установлено, что ЭФР, рецептор к ЭФР и их лиганды важны не только для клеточной пролиферации, но и для опухолевой прогрессии, и таких процессов, как клеточное движение, клеточная адгезия, инвазия, клеточной выживание и ангиогенез [Rosen and Goldberg 1989; Price et al., 1996; Shibata et al., 1996]. Было продемонстрировано, что