+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Природные иммуноглобулины как нуклеазы и протеазы в норме и при ВИЧ-инфекции

  • Автор:

    Одинцова, Елена Сергеевна

  • Шифр специальности:

    03.00.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2007

  • Место защиты:

    Новосибирск

  • Количество страниц:

    112 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АИЗ - аутоиммунное(ые) заболевание(я)
АТ - антитела АГ - антиген(ы)
СКВ - системная красная волчанка PC - рассеянный склероз Н - тяжелая цепь иммуноглобулинов L - легкая цепь иммуноглобулинов С - константная область иммуноглобулинов
Vl и Vh- вариабельные области легкой и тяжелой цепи антител, соответственно
Fv- исскуственно созданный фрагмент, состоящий из Vl и Vh доменов
Fc- константный домен антител
Fab - антиген связывающий домен
ВИП - вазоактивный интестинальный пептид
ОТ - обратная транскриптаза ВИЧ-1, ревертаза
ВИЧ - вирус иммунодефицита человека
ГЛАП - генерализованная лимфоаденопатия
ЧСА - человеческий сывороточный альбумин
ПААТ - полиакриламидный гель
ТСХ - тонкослойная хроматография
MES - 2-морфолиноэтил-сульфокислота
Трис - трис(гидроксиметил)аминометан
ЭГТА - (этилендиокси)диэтилендинитрилотетрауксусная кислота
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
SDS - додецилсульфат натрия
БФ - бромфеноловый синий
ДТТ - 1,4-дитиотреитол
PMSF - фенилметансульфонилфторид
AEBSF - 4-(2-аминоэтил)-бензенсульфонилфлюорид гидрохлорид
Ser - серии
His - гиститдин
Asp - аспартат
Ala - аланин
MCA - 7-амидо-4-метилкумарин
PFR-MCA - Pro-Phe-Arg- 7-амидо-4-метилкумарин
Boc-IEGR-MCA - третбутилоксикарбонил-Ile-Glu-Gly-Arg- 7-амидо-4-метилкумарин Boc-VLK-MCA - N- третбутилоксикарбонил ^а1-Ьеи-Ьу5-7-амидо-4-метилкумарин

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Природные иммуноглобулины
1.1.1. Структура антител и основы их разнообразия
1.1.2. Антитела - ферменты
1.1.3. Взаимодействия антигенов с антителалш
1.1.4. Уровни антител при аутоиммунных заболеваниях
1.2. ДНКазная активность антител
1.2.1. Ферменты, гидролизующие ДНК
1.2.2. Антитела к ДНК и абзимы с нуклеазными активностями при различных патологиях
1.2.3. Механизм действия ДНК-гидролизующих антител
1.3. Протеазы и антитела с протеолитической активностью
1.3.1. Протеазы человека
1.3.2. Абзимы-протеазы
1.4. Иммуноглобулины молока человека с каталитическими активностями
1.4.1. Компоненты молока человека и их роль
1.4.2. Иммуноглобулины молока
1.4.3. Абзимы молока человека
1.5. Природные каталитически активные антитела и их возможная биологическая роль в норме и при патологии
1.6. ВИЧ-инфекция
1.6.1. Некоторые особенности ВИЧ-инфекции
1.6.2. Функционирование системы иммунитета при вирусных инфекциях
1.6.2.1. Клеточный иммунный ответ
1.6.2.2. Гуморальный иммунный ответ
1.6.2.3. Нарушения гуморального иммунитета и аутоиммунный
ответ
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Реактивы и материалы
2.2. Методы
2.2.1. Очистка иммуноглобулинов крови больных ВИЧ-инфекцией
2.2.2. Выделение иммуноглобулинов из молока человека
2.2.3. Выделение казеина из молока человека
2.2.4. Выделение ревертазы
2.2.5. Концентрирование препаратов белков
2.2.6. Определение концентрации белка
2.2.7. Электрофоретический анализ белков
2.2.8. Перенос белков на нитроцеллюлозную мембрану и 45 окрашивание коллоидным раствором серебра
2.2.9. Иммуноферментное окрашивание IgG и их субъединиц
2.2.10. Определение протеолитической активности антител
2.2.11. Определение ДНКазной активности антител
2.2.12. Определение типа протеолитической активности 47 иммуноглобулинов методом ингибиторного анализа
2.2.13. Определение субстратной специфичности 43 иммуноглобулинов
2.2.14. Определение оптимального значения pH в реакции 43 гидролиза казеина
2.2.15. Тестирование казеин-гидролизующей активности антител in 43 situ после SDS-электрофореза
2.2.16. Тестирование казеин-гидролизующей активности антител in 49 situ в геле, содержащем субстрат
2.2.17. Тестирование ДНК-гидролизующей активности in situ в 49 геле, содержащем субстрат
2.2.18. Исследование взаимодействия абзимов с аффинными 49 сорбентами
2.2.19. Гидролиз казеина классическими протеазами: трипсином, 50 химотрипсином, протеиназой К
2.2.20. Фосфорилирование В-казеина киназами молока
2.2.21. Разделение молекул антител с легкими цепями к- и Х-типа
2.2.22. Определение кинетических параметров гидролиза 51 субстратов
2.2.23. Гидролиз пептидов
2.2.24. Определение содержания металлов в образцах антител
2.2.25. Хроматография на Benzamidine-Sepharose
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Выделение иммуноглобулинов из крови и молока человека
3.2. Скрининг протеолитической и ДНК-гидролизующей активности в ^ препаратах антител крови больных ВИЧ-инфекцией
3.3. Доказательство наличия у антител из сыворотки крови больных ^ ВИЧ-инфекцией и молока здоровых доноров каталитических функций
3.3.1. Гель-фильтрация в условиях «кислого шока»
3.3.2. Взаимодействие абзимов с аффинными сорбентами
3.3.3. Анализ активности антител в геле (зимография)

2.2.19. Гидролиз казеина классическими протеазами: трипсином,
химотрипсином, протеиназой К
Оптимальные условия гидролиза казеина протеазами были подобраны путем варьирования концентраций ферментов и времени реакции. Для каждого фермента реакционная смесь объемом 10 мкл содержала 6,2 мкг казеина и одну из классических протеаз в специально подобранной оптимальной концентрации: 0,32 мкг/мл трипсина, 0,064 мкг/мл химотрипсина, или 0,1 мкг/мл протеиназы К. Реакцию проводили 10-15 мин при 30°С, после чего продукты реакции анализировали БПБ-электрофорезом в 12,5% ПААГ, как описано ранее.
2.2.20. Фосфорилирование 13-казеина киназами молока
К 4 мкл нативного человеческого молока добавляли [у-32Р]АТР с удельной активностью 2-3 МБк, после чего смесь выдерживали 14-16 ч при температуре 30°С. Далее проводили БЭБ-электрофорез в 12,5% ПААГ, закладывали радиоавтограф на 1,5-2 ч. Полоску, соответствующую казеину вырезали и проводили пассивную элюцию из геля белка буфером, содержащим 1 М Трис-НС1, pH 8,8, 0,4% БОБ в течение 14-16 ч. Элюированный казеин осаждали 10% ТХУ, полученный осадок растворяли в 0,1 МТрис-НС1, pH 9,0. Полученный препарат казеина использовали для анализа протеолитической активности АТ.
2.2.21. Разделение молекул АТ с легкими цепями к- и А-типа
Препарат АТ (0,3 мг) наносили параллельно на колонки с анти-к ^О-БерЬагоэе и анти-А ^О-БерФалже (0,5 мл, 7x15 мм), предварительно уравновешенные буфером, содержащим 50 мМ Трис-НС1, pH 7,5, 100 мМ ИаСЬ Далее колонки промывали последовательно 1 мл буфера А; 1 мл 20 мМ Трис-НС1, pH 7,5, содержащим 1 М ЫаС1, затем 1 мл буфера А. Фракцию АТ, содержащую легкую цепь к- или А-типа, элюировали 0,1 М глицин-НСІ, pH 2,6 и сразу после выхода с колонки нейтрализовали 1,5 МТрис-НС1, pH 8,0. Затем проводили диализ в течение 14 ч против 100 объемов 20 мМ Трис-НС1, pH 7,5, 50 мМ №0, 0,01% №N3 (8 °С). Уровень протеолитической и ДНК-азной активностей полученных фракций оценивали в реакции гидролиза казеина и ДНК плазмиды рШиеэспрЬ

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.095, запросов: 967