Кинурениновый путь окисления мелатонина у животных

• Автор: Розов, Станислав Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 92 с.

Оглавление
Список сокращений
Введение
1 Обзор литературы
1.1 Синтез мелатонина
1.2 Мелатонин - мультифункциональное соединение
1.3 Локальные функции мелатонина
1.3.1 Сетчатка
1.3.2 Слизистая оболочка кишечника
1.3.3 Кожные покровы
1.3.4 Клетки крови
1.4 Мелатонин - как фармакологический агент
1.5 Распад
1.5.1 Структура молекулы мелатонина
1.5.2 Активированные кислородные метаболиты
1.5.2.1 Супероксид-анион радикал (02*Д
1.5.2.2 Перекись водорода (Н202)
1.5.2.3 Гидроксильный радикал (НО*)
1.5.2.4 Синглетный кислород ('02)
1.5.3 Другие окислители неферменгативной природы
1.5.4 Окислители ферментативной природы
1.5.4.1 Индоламин-2,3-диоксигеназа (ИДО)
1.5.4.2 Миелопероксидаза (МПО)
1.5.4.3 Цитохром С
1.5.5 Системы ex vivo
1.6 АФМК и АМК - факты и перспективы
1.7 Резюме
2 Материалы и методы
2.1 Экспериментальные животные
2.2 Реактивы
2.3 Оборудование
2.4 Методы
2.4.1 Синтез, очистка и идентификация АФМК
2.4.2 Определение содержания мелатонина, АФМК и АМК с помощью ВЭЖХ
2.4.3 Методы экстракции анализируемых веществ
2.4.4 Определение АФМК и АМК в крови и сетчатке крыс
2.4.5 Определение содержания АФМК в спинномозговой жидкости крыс методом микродиализа in vivo
2.4.6 Определение мелатонина АФМК и АМК в крови, сетчатке и эпифизе цыплят и изучение их кинетики
2.5 Получение и обработка данных
3 Результаты
3.1 Определение спектральных характеристик продукта окисления мелатонина перекисью водорода
3.2 Масс-спектрометрический анализ
3.3 Экстракция и анализ предполагаемых метаболитов мелатонина в биологическом материале с помощью ВЭЖХ
3.4 Определение содержания мелатонина, АФМК и АМК в крови, сетчатке и эпифизе цыплят и изучение их кинетики
3.5 Определение содержания АФМК в крови и сетчатке крыс
3.6 Определение содержания АФМК в спинномозговой жидкости крыс методом микродиализа in vivo
4 Обсуждение
5 Выводы
6 Список литературы

Список сокращений
АФМК - Ы-ацетил-1М-формил-5-метоксикинуренамин
АМК - Ы-ацетил-5-метоксикинуренамин
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ИДО - индоламин 2,3-диоксигеназа
Ml 10 - миелопероксидаза
ТФЭ - твердофазная экстракция
УФ - ультрафиолетовый
А2Е - бис-ретинилиден-этаноламин
RZR - retinoid Z receptor

Глава 2. Материалы и методы
2.1. Экспериментальные животные
Исследования in vivo проводились на крысах-самцах, (Rattus norvegicus, линия Wistar), возраст 3 месяца, а также на цыплятах-самцах (Gallus gallus, порода White Leghorn), возраст 2 недели. Выбор объектов для исследования был продиктован широким использованием их в качестве экспериментальных моделей в биохимии, а также возможностью представить сравнительные данные по исследуемым показателям у представителей двух классов позвоночных. Перед началом эксперимента животные содержались в условиях циклического освещения с инвертированным ритмом (12/12; фотофаза 21.00-09.00) минимум 2 недели для подстройки фазы, корм и воду получали ас! libitum, освещение на дне клеток в световую фазу цикла составляло 300 люкс, температура в помещении +18-23°С. К моменту эксперимента вес животных составлял 170± 15 г.
2.2. Реакшпы
В работе были использованы мелатонин и 30% Н202 (Sigma, США), стандарт АФМК (синтезирован и очищен нами как описано в разделе “Методы”), стандарт АМК (предоставлен лабораторией проф. Russel J. Reiter (унив. шт Техас, США), газообразный азот (AirGas, США). Хлористый метилен (НеваРеактив, Россия) и метанол (Fisher Co., США) использовали при экстракции; ацетонитрил (Криохром, Россия), Н3РО4 и K2ITPO4 (Fisher Co., США) - как компоненты подвижной фазы для ВЭЖХ.
Дополнительную деионизацию и ультрафильтрацию дистиллированной воды проводили на установках US Filter Purelab Plus PL5114 (U.S. Filter, США) или Millipore (Bedford, США).
Все реактивы имели квалификацию степени очистки не ниже X4/HPLC grade, если не оговорено иное.