Биохимические и цитохимические критерии в оценке эффективности использования липосомальных лекарственных препаратов при острой экспериментальной печеночной недостаточности, вызванной воздействием четыреххлористого углерода

• Автор: Романова, Людмила Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Ставрополь
• Количество страниц: 140 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика свойств четыреххлористого углерода, влияние на обменные процессы в организме. Биологические модели, используемые для изучения острой печеночной недостаточности
1.2. Биохимические критерии и лабораторная диагностика функций печени при её патологии
1.3. Лекарственная коррекция нарушенных функций печени
1.4. Получение, характеристика и биологические свойства липосом, осуществляющих направленный транспорт лекарственных средств
ГЛАВА 2. Постановка эксперимента и методы исследования
2.1. Постановка эксперимента
2.2. Методы исследования
2.2.1. Биохимические методы исследования
2.2.1.1. Определение продуктов перекисного окисления липидов
2.2.1.2. Определение суммарной пероксидазной активности
2.2.1.3. Определение активности каталазы
2.2.1.4. Определение содержания глюкозы
2.2.1.5. Определение содержания общего белка
2.2.1.6. Определение содержания мочевины
2.2.1.7. Определение тимоловой пробы
2.2.1.8. Определение уровня общего холестерина
2.2.1.9. Определение уровня триглицеридов
2.2.1.10. Определение общего билирубина
2.2.1.11. Определение активности аминотрансфераз
2.2.1.12. Определение активности щелочной фосфатазы
2.2.2. Цитоэнзимохимические методы исследования
2.2.2.1. Определение активности миелопероксидазы
2.2.2.2. Определение активности кислой фосфатазы
2.2.3. Гистоморфологическое исследование
2.2.4. Получение фосфолипидов из головного мозга
2.2.5. Тонкослойная хроматография
2.2.6. Получение липосом методом «выпаривания и обращения фаз» и включения в них лекарственных средств методом «замораживания-
оттаивания"
2.2.7. Подготовка липосомальных препаратов для электронномикроскопического исследования
2.3. Статистическая обработка результатов исследования
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Биохимические и цитохимические показатели сыворотки крови лабораторных животных при формировании острой печеночной недостаточности, вызванной введением четыреххлористого углерода
3.2. Фармакологическая коррекция острой печеночной недостаточности
3.2.1. Биохимические критерии лабораторной диагностики в оценке эффективности использования интактных лекарственных препаратов
3.2.2. Коррекция экспериментальной острой печеночной недостаточности с помощью липосомальных лекарственных препаратов
3.3. Гистологические критерии в оценке степени тяжести экспериментальной
острой печеночной недостаточности и эффективности её лечения
ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ АлАТ - аланинаминотрансфераза АсАТ — аспартатаминотрансфераза АТФ - аденозинтрифосфат ГГТ - гаммаглутамилтрансфераза ДОФА - диоксифснилаланин КФ - кислая фосфатаза ЛДГ - лактатдегидрогеназа ЛП - липопротеины
ЛПВП - липопротеины высокой плотности
ЛПНП - липопротеины низкой плотности
ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности
ЛХАТ - лецитинхолестеринацилтрансфераза
МДА - малоновый диальдегид
МПО - миелопероксидаза
НАДФ - никотинамиддинуклеотидфосфат
ОПН — острая печеночная недостаточность
ПВК - пировиноградная кислота
ПОЛ — перекисное окисление липидов
СПА - суммарная пероксидазная активность
ТАГ - триацилглицсрид
ТЕК - тиобарбитуровая кислота
ФГУЗ СтавНИПЧИ - Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора ФЛ - фосфолипиды ФЭК — фотоэлектроколориметр ХС - холестерин
ЦНС - центральная нервная система
ЩФ - щелочная фосфатаза
CCI 4 - четыреххлористый углерод

фотометре Beckman DU-7 (США). Величину оптической плотности определяли в течение 3-4 минут до стабилизации голубой окраски. Результат выражали в единицах оптической плотности на 1 мл сыворотки крови.
2.2.1.З. Определение активности каталазы
Количественное определение активности каталазы проводили по методу С.И. Крайнева (1974). Об активности каталазы можно судить либо по количеству перекиси водорода, разложившейся под влиянием этого фермента, либо по количеству выделившегося при этом кислорода.
1. Приготовление суспензии эритроцитов. Отмеряли в пробирку 5 мл 0,85% раствора хлористого натрия и добавляли 0,1 мл крови, полученную суспензию тщательно перемешивали;
2. Отмеривали в 2 пробирки по 5 мл 10% раствора серной кислоты;
3. В 2 тигля добавляли по 2 мл 0,5м раствора Н202;
4. Отмеривали в 2 стакана по 6 мл 0,85% раствора хлористого натрия и по 2 мл заранее приготовленной суспензии эритроцитов;
5. С помощью пинцета помещали на дно каждого стакана тигель с перекисью водорода;
6. В первый стакан /контроль/ вливали из пробирки 5 мл 10% серной кислоты и перемешивали содержимое (при этом каталаза инактивируется);
7. Во второй стакан /опыт/ опрокидывали тигель, при этом каталаза эритроцитов начинается разлагать перекись водорода. Перемешивание содержимого второго стакана продолжали в течение 30 секунд, после чего вливали в него 5 мл 10% раствора серной кислоты из пробирки для остановки реакции. Избыток перекиси водорода в обоих стаканах /контроль и опыт/ титровали 0,1 н раствором перманганата калия до появления розовой окраски, не исчезающей в течение 30 секунд.
Активность каталазы выражали в милимолях перекиси водорода, разложенной 1 мл крови в течение минуты.