+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Изучение механизмов эпигенетической регуляции экспрессии генов на модели вируса саркомы птиц

  • Автор:

    Полешко, Андрей Сергеевич

  • Шифр специальности:

    03.00.04, 03.00.03

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2008

  • Место защиты:

    Новосибирск

  • Количество страниц:

    105 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы


ОГЛАВЛЕНИЕ

ОГЛАВЛЕНИЕ
ПРИНЯТЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Эпигенетическая регуляция экспрессии гена
1.1.1. Механизмы эпигенетической регуляции экспрессии гена
1.1.2. Модификации гистонов
1.1.3. Метилирование ДНК
1.1.4. РНК-интерференция
1.2. Эпигенетическое молчание ретровирусов
1.2.1. Репликативный цикл ретровирусов
1.2.2. Механизмы эпигенетического молчания ретровирусов
1.3. Методы активации транскрипционно-молчащих ретровирусов
1.4. Применение методов РНК-интерференции для определения функции
гена
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.1.1. миРНК использованные в работе
2.1.2. Антитела, использованные в работе
2.1.3. Олигодезоксирибонуклеотиды
2.1.4. Библиотека миРНК
2.2. Методы
2.2.1. Культивирование клеток млекопитающих, выделение субпопуляции 42 клеток НеЬа несущих транскрипционно-молчащий ретровирусный репортерный СРР-ген
2.2.2. Анализ экспрессии ОРР гена методом проточной цитофлюорометрии
2.2.3. Определение белка методом Вестерн Блот
2.2.4. РНК-интерференция
2.2.5. Трансфекция клеток плазмидиой ДНК
2.2.6. Реакция ОТ ПЦР в реальном времени
2.2.7. Скрининг библиотеки миРНК
2.2.8. Статистическая обработка результатов

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
3.1. Получение и анализ субпопуляции клеток НеЪа несущих молчащий
ретровирус, кодирующий репортерный СЕР ген
3.1.1. Получение субпопуляции НеЬа ТИ клеток
3.1.2. Анализ полученной субпопуляции НеЬа ТИ клеток
3.2 Применение методов РНК интерференции для поиска клеточных
факторов участвующих в поддержании эпигенетического молчания
3.2.1. МиРНК нокдаун клеточных белков 1ШЛС1 и ВАХХ приводит к 51 реактивации экспрессии молчащего ретровируса
3.2.2. Оценка эффективности и специфичности нокдауна гена-мишени 53 методами РНК-интерференции
3.2.3. Анализ неспецифической реактивации с использованием контрольных 55 миРНК
3.2.4. Влияние положения сайта интеграции на реактивацию молчащего 56 ретровируса
3.2.5. Роль белка НР1 в поддержании эпигенетического молчания
3.2.6. Экспрессия вирусных белков ингибиторов 1ШАС1 и ЭАХХ приводит к 61 реактивации эпигенетически-молчащего ретровируса
3.2.7. Влияние промотора репортерного гена на эпигенетическое молчание
3.3. Скрининг библиотеки миРНК с целью поиска клеточных факторов
участвующих в поддержании эпигенетического молчания.
3.3.1. Создание системы скрининга библиотек миРНК с высокой пропускной
способностью
3.3.2. Оценка чувствительности и воспроизводимости системы скрининга
измерение 7'- фактора
3.3.3. Скрининг библиотеки миРНК, содержащей известные клеточные
эпигенетические регуляторы
3.3.4. Подтверждение результатов скрининга библиотеки миРНК
3.3.5. Анализ семейств генов, выявленных в ходе скрининга
3.3.6. Изучение влияния положения сайтов интеграции на клеточные
механизмы, контролирующие ретровирусное эпигенетическое молчание
3.3.7. Модель ретровирусного эпигенетического молчания
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
выводы
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ОТ АВТОРА

На сегодняшний момент механизм эпигенетического ретровирусного молчания изучен не до конца, тем не менее, известны основные клеточне механизмы регулирующие данный процесс: модификации гистонов, метилирование провирусной ДНК и РНК-интерференция. Наиболее широко для реактивации ретровирусов и ретровирусных векторов в культурах клеток млекопитающих используют ингибиторы гистоновых деацетилаз, входящих в большинство клеточных репрессорных комплексов (Jepsen K. et а], 2002; Redner R.L. et al, 2005), и ингибиторы ДНК метилаз, предотвращающие de novo ДНК метилирование и, тем самым, освобождая промоторные и генные области провируса от ДНК метилирования (Kuriyama S. et al, 1998; Mclnemey J.M. et al, 2000; Zentilin L. et al, 2000).
Широко применяемыми ингибиторами гистоновых деацетилаз являются: трихостатин A (TSA), субероиланилид гидроксамовая кислота (SAHA), направленные против всех классов гистоновых деацетилаз; вальпроевая кислота (VPA), трапоксин (Trapoxin), направленные против представителей I-го и Il-го класса. Данные ингибиторы в основном применяются для реактивации ретровирусных векторов в культурах клеток млекопитающих (de Ruijter A.J. et al, 2003; Ylisastigui L. et al, 2004), но некоторые из низ, например VPA, применяются для лечения ВИЧ инфекции (Lehrman G. et al, 2005; Siliciano J.D. et al, 2007; Steel A. et al, 2006).
Среди ингибиторов ДНК метилтрансфераз для реактивации транскрипции применяются 5-азацитидин (5-aza-C) и 5-аза-2'дезоксицитидин (5-aza-dC). Оба данных ингибитора участвовали в клинических испытаниях в течении последних 20 лет (Karpf A.R. et al, 1999; Liang G. et al, 2002). Тем не менее, из-за высокой токсической активности данные препараты не используются для лечения пациентов. Однако, исследования доказали высокую эффективность данных препаратов, и поиск новых менее токсичных специфических ингибиторов ДНК метилтрансфераз продолжаются до сих пор.
Механизмы эпигенетического ретровирусного молчания, описанные выше, предполагают совместное участие и модификаций хроматина, и ДНК метилирования. Многочисленные исследования выявили большую частоту реактивации молчащих ретровирусов, после обработки культур клеток одновременно ингибиторами гистоновых деацетилаз и ДНК метилтрансфераз одновременно, чем по отдельности (Baqir S. et al, 2006; Senigl, F. et al, 2008).
Таким образом, в данный момент для противовирусной терапии одним из перспективных направлений является поиск новых генов мишеней, участвующих в поддержании ретровирусного эпигенетического молчания.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.114, запросов: 967