+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Изучение механизмов регуляции трансляции мРНК YB-1

  • Автор:

    Лябин, Дмитрий Николаевич

  • Шифр специальности:

    03.00.03

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2008

  • Место защиты:

    Пущино

  • Количество страниц:

    100 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I. Мультифункциональный Y-бокс-связывающий белок 1 (YB-1)
1. История открытия и номенклатура семейства Y-бокс-связывающих белков
2. Свойства и структурно-функциональная организация Y-бокс-связывающих белков
2.1. Общие свойства Y-бокс-связывающих белков
2.2. Свойства Y-бокс-связывающего белка 1 (YB-1)
2.2.1. Взаимодействие YB-1 с белками
2.2.2. Особенности взаимодействия YB-1 с ДНК и РНК
3. Функции YB-1 в ядре
3.1. Участие YB-1 в транскрипции
3.2. Участие YB-1 в репликации и репарации ДНК
3.3. Участие YB-1 в сплайсинге мРНК
4. Функции YB-1 в цитоплазме
5. Перераспределение YB-1 между ядром и цитоплазмой
6. Участие YB-1 в эмбриональном развитии
7. YB-1 и раковая трансформация клеток
8. Структура гена YB-1 и регуляция его экспрессии
II. Роль 3’ НТО мРНК в регуляции трансляции
1. Регуляция с участием белков, взаимодействующих с 3’ НТО
2. Регуляция трансляции микрорегуляторными РНК, специфически связывающимися с 3 ’ НТО
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Использованные в работе плазмиды. Получение конструкций, содержащих ген YB-1 с мутациями в регуляторной последовательности
2. Трансформация Escherichia coli плазмидной ДНК
3. Выделение плазмидной ДНК из Escherichia coli
4. Обработка плазмиды рестриктазой

5. Лигирование Т4-ДНК-лигазой
6. Полимеразная цепная реакция (Г1ЦР)
8. Выделение рекомбинантного РАВР
9. Выделение рекомбинантного YB
10. Бесклеточная система трансляции (БСТ) из ретикулоцитов кролика
11. Электрофорез белков в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия
12. Аналитический электрофорез нуклеиновых кислот в геле агарозы
13. Электрофорез РНК в полиакриламидном геле в присутствии мочевины
14. Метод замедления подвижности РНК-белковых комплексов в геле (Gel-shift assay)
15. РНК-белковые сшивки под действием ультрафиолетового облучения
16. Центрифугирование в градиенте концентрации сахарозы
17. Получение суммарной РНК из лизата ретикулоцитов кролика
18. Получение меченого фрагмента кДНК (ДНК-зонда)
19. Детекция мРНК YB-1 при помощи радиоактивного зонда (Northern-dot анализ)
20. Дефосфрилирование фрагмента РНК
21. Мочение фрагмента РНК по 5’ концу
22. Картирование сайтов связывания белков с фрагментом РНК
23. Биотиншшрование РНК
24. Выделение белков лизата ретикулоцитов кролика с использованием биотинилированной РНК
25. Иммунологический анализ белковых препаратов (иммуноблоттинг)
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. YB-1 ингибирует трансляцию собственной мРНК на стадии инициации, подавляя присоединение к мРНК 43 S преинициаторного комплекса
2. РАВР стимулирует трансляцию мРНК YB-1 на стадии инициации, стимулируя присоединение к мРНК 43 S преинициаторного комплекса
3. Локализация сайтов связывания УВ-1 и РАВР в регуляторной
. последовательности мРНК УВ-1 методом футпринтинга
4. Подтверждение специфичности взаимодействия УВ-1 и РАВР с сайтами их связывания в регуляторной последовательности мРНК УВ-1,
идентифицированными методом футпринтинга
5. РАВР и УВ-1 способны вытеснять друг друга из комплекса с регуляторной последовательностью мРНК УВ
6. Влияние мутаций в УВ-1- и РАВР-связывающих сайтах мРНК УВ-1 на её трансляцию
7. РАВР восстанавливает трансляцию мРНК УВ-1, подавленную белком УВ
8. Влияние полиаденилирования на трансляцию мРНК УВ
ОБСУЖДЕНИЕ
1. Регуляция трансляции мРНК УВ-1 и её место в общей регуляции белкового синтеза
2. Возможные механизмы влияния УВ-1 и РАВР на трансляцию мРНК УВ
3. Специфическое взаимодействие УВ-1 с РНК
4. Негативный эффект полиаденилирования мРНК УВ-1 на её трансляцию как новый способ регуляции синтеза УВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ

нуклеотидов (с 1175 по 1205) была транскрибирована Т7 полимеразой с плазмиды pBluescript II SK YB-1 ДРАВР, линеаризованной по сайту Pstl.
6. мРНК YB-1 AYB-1 К+А‘, длиной «1500 нуклеотидов, содержащая полную кодирующую последовательность, 5' НТО и 3' НТО с нуклеотидными заменами в YB-1 связывающих сайтах была транскрибирована Т7 полимеразой с плазмиды pBluescript II SK YB-1 ДУВ-1, линеаризованной по сайту Pstl.
7. фрагмент З’НТО мРНК YB-1 (с 1070 по 1240) был транскрибирован Т7 полимеразой с плазмиды pBluescript II SK 1070-1240 WT, линеаризованной по сайту i?c/13 611.
8. фрагмент З’НТО мРНК YB-1 (с 1070 по 1240) с делецией 30 нуклеотидов (с 1175 по 1205) был транскрибирован Т7 полимеразой с плазмиды pBluescript II SK 1070-1240 ДРАВР, линеаризованной по сайту ЕсИЪбИ.
9. фрагмент З’НТО мРНК YB-1 (с 1205 по 1329) был транскрибирован Т7 полимеразой с плазмиды pBluescript II SK II фрагмент, линеаризованной по сайту Oral.
Ю.мРНК глнжуронидазы (GUS) К+А‘, длиной « 1940 нуклеотидов была транскрибирована Т7 полимеразой с плазмиды pJ103(CAA)i9GUS, линеаризованной по сайту Hindttl.
11. фрагменты РНК длиной 39 нуклеотидов, содержащие сайты специфического связывания YB-1 или мутированные сайты специфического связывания YB-1 транскрибированы с использованием в качестве матрицы химически синтезированных ДНК-олигонуклеотидов («Синтол», г. Москва, Россия), включающих промотор для Т7 РНК-полимеразы и последовательность, кодирующую РНК (Таблица 3).
Таблица 3. ДНК-олигонуклеотиды, использованные при синтезе РНК-фрагмснтов, содержащих УВ-1 -связывающий сайт (исходный или с заменами)
YB-1 -связывающий сайт (исходные и с заменами) Последовательность ДНК-олигонуклеотвдов, использованных в качестве матричной цепи (синим отмечен промотор 17 РНК-пояимеразы, красным - нуклеотидные замены).
UCCAGCA АОТСАОТСАСТСЛСтТСТТССТСОАССТСЛОТСАОТСАОТСССТАТАОТСАОТСОТАТТА
UCCAACA АОТСЛОТСАОТСАОТСТГ1'СТТСС;АСОТСЛОТСА(;ТСАО’1'СССТАТАОТСЛОТСОТЛ'1ТЛ
UGGAAGA ЛОТСАОТСАОТСАОТСТТСТТССЛеОТСАОТСАСГГСАаТСССТЛТАОТСАаТСОГЛТТЛ
UCCGGCG ЛОТСАОТСАСгТСАОТССССССССАСОТСЛОТСАОТСАОТСССТАТАОТОЛОТСОТЛТГЛ

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.096, запросов: 967