Дизайн, конструирование и изучение свойств поли-CTL-эпитопного Т-клеточного иммуногена - кандидата ДНК-вакцины против ВИЧ-1/СПИД

• Автор: Белавин, Павел Александрович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 108 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Молекулярная биология ВИЧ
1.2. Проблемы создания вакцины против ВИЧ
1.2.1. Антигенная изменчивость ВИЧ
1.2.2. Проблемы тестирования вакцин
1.2.3. Значение иммунных механизмов в защите от ВИЧ-инфекции
1.2.4. Механизмы иммуносупрессии и имуннопатологии при ВИЧ-инфекции
1.3. Традиционные стратегии вакцинации
1.3.1. Стратегии вакцинации, основанные на использовании аттенуированного вируса
1.3.2. Стратегии вакцинации, основанные на использовании инактивированного вируса
1.3.3. Стратегии вакцинации, основанные на использовании рекомбинантных вирусных белков
1.4. Новые нетрадиционные стратегии вакцинации, основанные на использовании синтетических полиэпитопных иммуногенов
1.4.1. Системы доставки вакцинных конструкций на основе использования плазмиды ой ДНК
1.4.2. Системы доставки вакцинных конструкций на основе использования живых рекомбинантных векторов
1.4.3. Дизайн полиэпитопных иммуногенов
1.4.4. Синтез генов, кодирующих полиэпитопные иммуногены
1.5. Вакцинный иммунитет и клиническое заболевание
1.6. Биологическое тестирование CTL-вакцин
1.6.1. Тестирование иммуногенности вакцин
1.7. Заключение по обзору литературы
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Клетки, плазмиды, ферменты, питательные среды, олигонуклеотиды
2.2. Экспрессия гена TCI в клетках E.coli
2.3. Трансфекция COS- клеток
2.4. ОТ-ПЦР РНК, выделенной из COS клеток

2.5. Получение поликлональной сыворотки к белку TRX-TCI
2.6. Определение ВИЧ-антигенности рекомбинантных белков GST-TCI
и TRX-TCI методами ИФА и иммуноблот-гибридизации
2.7. Получение плазмиды для клонирования гена TCI в эукариотической системе
2.8. Иммунизация мышей
2.9. Определение пролиферации Т-лимфоцитов
2.10. Определение титров антител с помощью ИФА
2.11. Определение количества CTL с помощью реакции ELISPOT
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Дизайн искусственного иммуногена, содержащего множественные CTL-эпитопы основных антигенов ВИЧ
3.2. Конструирование искусственного гена
3.3. Конструирование рекомбинантных плазмид для экспрессии гена TCI в прокариотической и эукариотической системах
3.3.1. Получение рекомбинантных плазмид, экспрессирующих ген TCI в E.coli
3.3.2. Получение рекомбинантной плазмиды, экспрессирующих ген TCI в эукариотической системе
3.4. Анализ экспрессии гена по определению синтеза специфической мРНК
3.5. Иммунохимическое исследование продукта гена TCI
3.6. Исследование иммуногенности плазмидной ДНК, кодирующей белок TCI
3.6.1. Оценка количества цитотоксических Т-лимфоцитов иммунизированных животных
3.6.2. Оценка пролиферативной активности спленоцитов иммунизированных животных
3.6.3. Исследование титров антител в сыворотках крови иммунизированных животных
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
а.о. - аминокислотный остаток
ВИЧ-1 - вирус иммунодефицита человека I-го типа
ИФА - иммуноферментный анализ
МАТ - моноклональное антитело
ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с использованием в качестве матрицы РНК
ПЦР - полимеразная цепная реакция
СПИД - Синдром приобретенного иммунодефицита
CJRP- Circulating Recombinant Form/кольцевая рекомбинантная форма
ELISPOT - immunological assay based on ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent
Т,мд>’)/количественный иммунологический тест
GST - §кПайоп-5-1гап8Гега8е/глутатион-8-трансфераза
HLA - human leukocyte antigen/лейкоцитарный человеческий антиген
INF - интерферон
МНС - major histocompatibility complex/главный комплекс тканевой совместимости
MVA - modified vaccinia virus Ankara/модифицированный вирус Анкара
PBS - phosphate buffer soline/фосфатно солевой буфер
SIV - simian immunodeficiency viruse/вирус иммунодефицита обезьян
TAP, TAP1/TAP2 - transport-associated proteins/белки, связанные с транспортом
TCI - Т-клеточный иммуноген
TRX - thioredoxin/тиоредоксин

32/5-S
p°iy
MGARASVLSGGELDRW
■89 ta)
EKIRLRPGGkKKYKLKHIVWASRELERFAVNPGLLETSEGCRQILGQLQPSLQTGSEELRSLYNTVATLYCVHÇRIEIKDTKEA
30 40 SO ÉO 70 80 90
> < >
Рис. 5. Картирование В-клеточных эпитопов во фрагментах последовательностей белка TCI (KIRLRPGGKKKYKLKHIVWASRELERFAVN и GSEELRSLYNTVATL), принадлежащих белку р 17 (реконструировано по данным из Los Alamos HIV Molecular Immunologe’ Database). Стрелки ниже последовательности обозначают границы фрагментов белка TCI. Границы В-клеточных эпитопов обозначены стрелками выше последовательности.