Разработка методов оптической микроскопии и спектрального анализа применительно к исследованию новых противоопухолевых препаратов

• Автор: Назарова, Анна Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 172 с. : ил.

Список использованных сокращений
Глава I. Обзор литературы
1.1. Метод фотодинамической терапии
1.1.1. Молекулярные механизмы фотодинамического действия ФС
1.1.2. Реакционная способность АФК по отношению к биологическая молекулам
rj|, I. 1.3. Механизмы селективного накопления и локализации ФС в опухоли
I. 1.4. Биологические процессы, вызываемые ФДТ
I. 1.5. Способы доставки противоопухолевых препаратов
I. 1.6. Особенности химического строения и синтеза PC и хлоринов
I. 1.7. Физико-химические свойства ФС
I. 1.8. Биологические свойства ФС
I. 1.8. 1. Связывание ФС с компонентами плазмы крови и сыворотки. 27 I. 1.8.2. Механизмы проникновения, локализация и накопление ФС в
клетках
I. 1.8.3. Накопление ФС в различных тканях и органах
1.2. Исследование ФС методами оптической микроскопии и спектрального анализа
1.2.1. Базовые исследования основных физико-химических свойств ФС
1.2.2. Исследования ФС внутри клеток
1.2.3. Исследования локализации и накопления ФС в различных тканях и органах
Цель и задачи исследования
Глава II. Материалы и методы
II. 1. Химические реагенты
11.2. Использованные ФС
11.3. Изготовление липосом
11.4. Используемые приборы
11.5. Измерение генерации активных форм кислорода (АФК)
11.6. Определение фотостабильности ЦИХЛ
11.7. Молекулярные взаимодействия ФС в растворах
11.8. Эксперименты на культуре клеток
11.9. Приготовление экстрактов тканей мышей
0 II. 11. Разработка методик КОМИРСИ
II. 11.1. Методика изучения связывания ФС с компонентами плазмы и сыворотки крови на основе комбинирования методов гель-электрофореза и
КОМИРСИ
II. 11.2. Методика измерения концентрации ФС и их комплексов в живых
клетках методом КОМИРСИ
II. 11.3. Методика определения внутриклеточной локализации ФС методом КОМИРСИ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
AlPcSi, AIPCS2, AIPCS3, AIPCS4 - моно-, ди-, три-, тетрасульфатированные фталоцианины алюминия
AlPcSn, ZnlPcSn - сульфатированньй фталоцианины алюминия и цинка Azt- азидо-З’-деокситимидин
BODIPY-церамид - Ы-((4-(4,4-дифлуоро-5-(2-тионил)-4-бора-За,4а-диаза-з-индацен-3-ил) фенокси)ацетил)сфингозин
BPDMA - монокислотное производное бензопорфирина
CrEL - Кремофор EL
*ОН - гидроксильный радикал
*02 - синглетный кислород
Ог*-- супероксид-ион
Н2О2 - перекись водорода
НОг* - гидропероксидный радикал
LT - Lyso Tracker Yelow
L-Trp - триптофан
MACE - N-моноаспартил хлорина еб
mTHPC - тетра(л/-гидроксифенилхлорин)
PC- фталоцианины
PcSi, РсБг, РсБз, PcS4 -моно-, ди-, три-, тетра сульфатированные фталоцианины соответственно
PcSi.s, PcS2,4 и PcS3,8- смесевые субстанции со средним числом сульфогрупп 1,5, 2,4 и 3,8, соответственно
PcS„- безметальный сульфатированный фталоцианин
Rho-ФЭ - 14-(лиссамин родамин В сульфонил)фосфатидилэтаноламин
Rho-ФЭ - БЦлиссамин родамин В сульфонил)фосфатидилэтаноламин
TPPS - тетра(4-сульфонатофенил)порфирин
TrTR - трансферин конъюгированный с техасским красным
W- варфарин
ZnPc- фталоцианин цинка
АЛК - 5-аминолевуленовая кислота
АО - акридин оранжевый
АФК - активные формы кислорода
БАС - биологически активное соединение
спектров КР и флуоресценции с широким спектральным полем на CCD детекторе в диапазоне 350-800 нм. Спектрограф оборудован двумя сменными нарезными решетками (600 и 150 штрихов/мм, с максимумом отражения на 500 нм). Спектрометр оптически сопряжен с входной конфокальной камерой и имеет общую входную щель со спектрометрометром XY-500. Спектры флуоресценции могут быть записаны при использовании решетки 600 штрихов/мм со спектральным полем 150 нм и разрешением 0,15 нм, а при использовании решетки 150 штрихов/мм - со спектральным полем 600 нм и разрешением 0,6 нм.
интерференционный засшга:а
Рисунок 5. Схема экспериментальной установки для конфокальной сканирующей микроспектроскопии фирмы БНог (Франция) [Р’еоґапоу А. Ш а1., 1995].
Позиционирование спектрографа осуществляется с помощью механической системы. Калибровка по длинам волн выполняется с помощью линий неоновой, аргоновой или ртутной спектральных ламп или по плазменным линиям ионных лазеров. Подавление рассеянного света (приблизительно в 105 раз) обеспечивается за счет голографического фильтра во входной конфокальной камере.
Совмещение спектрометров с высоким разрешением (узкое спектральное поле) и низким разрешением (широкое спектральное поле) значительно расширяет область