Изучение механизма лизиса эритроцитов под влиянием порообразующих гемолитиков

• Автор: Бессонова, Светлана Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Ташкент
• Количество страниц: 120 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АВ- амфотерицин В, полиеновый антибиотик СТ- а-стафилотоксин- экзотоксин, продуцируемый Staphylococcus aureus.
М- мелиттин, токсический компонент яда медоносной пчелы.
Km- константа Михаэлиса.
Vmax- максимальная скорость транспорта.
ПА- полиеновые антибиотики.
ПЭГ - полиэтиленгликоль ДМСО - диметилсульфоксид
К.З.М.С.- количество замкнутых мембранных образований

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ
1. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР
1.1. Механизмы регуляции объема эритроцитов
1.2 Нарушение регуляции объема эритроцитов
порообразующими агентами и механизм гемолиза
1.3. Характеристика объектов исследования
1.3.1.Мелитти н
1.3.2. Амфотерицин В
1.3.3. Стафилотоксин
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Материалы
2.2 Методы
2.2.1 Получение суспензии эритроцитов и определение гемолитической активности
порообразующих веществ
2.2.2. Кондуктометрический метод определения количества замкнутых мембранных структур
в суспензии эритроцитов
2.2.3. Определение осмотической стойкости эритроцитов

2.2.4. Определение размера эритроцитов и их теней
2.2.5.Регистрация гемолиза с помощью видео-
цифровой микроскопии
2.2.6. Метод измерения спектров флуоресценции
2.2.7. Математическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Агрегатное состояние мелиттина при его действии
на эритроциты и размер мелиттиновой поры
3.1.1. Влияние анионов на гемолитическую активность мелиттина и его агрегатное состояние при
действии на эритроциты
3.1.2. Коллоидно-осмотический механизм гемолиза
и размер мелиттиновой поры
3.1.3. Обсуждение
3.2. Исследование пост-литических стадий коллоидноосмотического лизиса эритроцитов
3.2.1. Лизис клеток путем гипотонического шока
3.2.2. Лизис клеток под действием детергента
3.2.3. Лизис клеток порообразующими гемолитиками
3.2.4. Визуальное наблюдение пост-литического формирования теней эритроцитов
3.2.5. Регистрация гемолиза с помощью
видео-цифровой микроскопии
3.2.6. Обсуждение
3.3. Чувствительность эритроцитов человека и различных видов животных к коллоидно-осмотическому лизису

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
2.1 Материалы.
В работе были использованы:
- мелиттин, выделенный из яда медоносной пчелы Apis mellifera, любезно предоставленный доктором Е.Г.Костржевской (Институт биохимии им. Палландина, Киев, Украина);
- альфа-токсин S. aureus, любезно предоставленный проф. K.D. Hungerer ( лаборатория Behringwerke, Marburg, Germany);
- амфотерицин В, полученный из лаборатории Squibb France ( Франция );
- полиэтиленгликоли (ПЭГ) с молекулярными массами 1000, 3000-6000 ("Lobo Chema") и 1500 ("Ferak", Berlin);
- буметанид («Sigma» USA);
- фуросемид («Sigma» USA);
- Трис HCl ( Calbiochem- Behring Corp., Германия ).
Остальные реактивы были отечественного производства градации
"х.ч." или " ч.д.а.".
2.2 Методы.
2.2.1.Получение суспензии эуитуоцитов и определение
гемолитической активности порообуазующих веществ.
Свежую донорскую кровь получали у добровольцев (сотрудники лаборатории) по общепринятой методике (Справочник по