Радиочувствительность мезенхимальных стволовых клеток и получаемых из них для целей клеточной терапии клеток-предшественников кардиомиоцитов

• Автор: Семенкова, Ирина Витальевна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 91 с. : ил.

Глава 1. МЕЗЕНХИМАЛЬНЫЕ СТВОЛОВЫЕ КЛЕТКИ, ИХ БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА, ДИФФЕРЕНЦИРОВОЧНЫЕ ПОТЕНЦИИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ДЕЙСТВИЮ ИОНИЗИРУЮЩЕЙ РАДИАЦИИ (Обзор литературы)
1.1. Сравнительная характеристика МСК среди других типов стволовых клеток взрослого организма
1.2. Дифференцировочныс потенции МСК в культуре и целостном организме
1.3. Терапевтический эффект МСК и их дифференцирующегося клеточного потомства при поражениях сердечной мышцы
1.4. Радиочувствительность МСК
Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКИ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Получение культур кардиомиобластов из мезенхимальных стволовых клеток крысы и человека
2.2. Исследование радиочувствительности МСК и КМБ
2.3. Анализ кариотипа КМБ
2.4. Тестирование тератогенной, канцерогенной и мутагенной активности трансплантации КМБ
2.5. Метод проточной цитофлюорометрии для выявления специфических маркеров клеток стволового типа и оценки распределения клеток в популяции по фазам цикла
2.6. Методика мечения КМБ с помощью Тс-99ш
2.7.Схема экспериментов по изучению эффективности трансплантации КМБ на моделях индуцированной адриамицином кардиомиодистрофии у крыс и мышей
2.8. Тестирование жизнеспособности клеток культур МСК и КМБ при хранении при низкой температуре (2-4° С) и после замораживания в жидком азоте
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Общая характеристика культур МСК и КМБ
3.2. Сравнительная радиочувствительность МСК и КМБ человека и крыс
3.3. Распределение клеток культур МСК и КМБ по стадиям клеточного Цикла
3.4. Исследование кариотипа МСК и КМБ

3.5. Результаты тестирования мутагенного, канцерогенного и тератогенного эффектов КМБ
3.6. Распределение в органах и тканях сингенного и ксеногенного организма меченых Тс-99т кардиомиобластов
3.7. Терапевтическое действие трансплантированных кардиомиобластов в модели индуцированной адриамицином кардиомиодистрофии
3.8. Жизнеспособность МСК и КМБ при хранении в криобанке
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Выводы
Список литературы

Актуальность темы исследования.
В последние годы активно проводятся исследования биологических характеристик различных типов стволовых клеток и возможностей их применения в клинике, в первую очередь, для трансплантации с целью замещения поврежденных и погибших клеток [Sell S., 2004; Penn M.S., 2007], в том числе при лечении онкологических больных после интенсивной лучевой или комбинированной терапии, в результате которой будут повреждены не только клетки злокачественного новообразования, но и нормальные клетки различных жизненно важных органов пациента.
При этом наиболее перспективным считается использование стволовых клеток костного мозга взрослого человека, размноженных в культуре до необходимого количества и направленных специальными индукторами в сторону дифференцировки в различные клеточные линии, включая клетки-предшественники гемопоэтической стромы, остеоциты, хондроциты, гепатоциты, миоциты скелетных мышц, кардиомиоциты, нейральные клетки [Цыб А.Ф. и др., 2004, Dezawa М., Hoshino М., Ide С., 2005]. Использование этих клеток будет способствовать восстановлению соответствующих поврежденных тканей.
Мезенхимальные стволовые клетки (МСК), открытые и обстоятельно изученные в лаборатории отечественного исследователя А.Я.Фриденштейна, в последние годы стали одним из основных исходных элементов для проведения клеточной терапии, а в недалеком будущем, несомненно, станут таким же агентом для проведения генной терапии. В связи с этим актуальной становится проблема достаточно быстрой и воспроизводимой интегральной характеристики МСК и их дифференцированного клеточного потомства, производимых для целей.клеточной терапии с использованием различных критериев. Одним из этих критериев является клеточная радиорезистентность выращенной культуры клеток в стандартных условиях облучения. В литературе, также как и в наших собственных работах, есть достаточно много сведений о радиационной чувствительности клеток исходных культур МСК (начиная еще со времени, когда для их обозначения использовали термин - колониеобразующие единицы фибробластов - КОЕ-Ф), полученных из костного мозга человека и различных видов животных (мыши, крысы, морские свинки, собаки и др.). Клетки-предшественники гемопоэтической стромы всегда были более резистентными, чем гемопоэтические клетки-предшественники, величины их средней клеточной дозы Do при действии редкоионизирующей радиации были порядка

Таблица ЗЛО.
Динамика массы тела потомства первого поколения крыс-самок линии Вистар опытных (получавших ежедневные внутривенные инъекции по 105 КМБ) и двух контрольных групп
Исследуемая группа самок Число живых новорожденных крысят в группе Пол крысят в помете и их число Масса тела крысят (г), дни жизни
1 4 7 14 21
Биологический контроль 240 Самки-104 5,2±0,1 7,4^+0,3 11,2+0,4 19,4+1,3 27,7+1,8 49,3±2,3
Самцы -136 5,8+0,1 8,3+0,3 11,7+0,5 20,8+1,1 31,2+1,7 51,1±2,5
КМБ 260 Самки —127 5,4+0,1 8,0+0,2 11,2+0,4 20,8+1,0 28,8+1,7 50,5+3,3
Самцы -133 5,8±0,1 8,3+0,3 11,8+0,5 21,4+1,1 31,0+1,9 51,4+3,3
Плацебо 259 Самки - 123 5,3+0,1 8,7±0,3 12,6+0,3 22,1+0,7 30,6+1,1 50,1+1,7
Самцы - 136 5,6+0,2 9,2+0,2 13,1±0,3 22,3+0,6 31,2±1,0 52,2+1,9