Стереонаправленный синтез фрагментов внеклеточного полисахаридного адгезина Staphylococcus aureus

• Автор: Генинг, Марина Леонидовна
• Шифр специальности: 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 132 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Часть 1. Введение
Часть 2. Литературный обзор
2Л. Введение. Три поколения углеводных вакцин
2.2. Этапы разработки конъюгированных вакцин
2.3. Примеры конструирования углеводных вакцин третьего поколения. Влияние структуры олигосахаридного лиганда на антигенные и иммуногенные свойства
у глевод-белковых конъюгатов
2.3.1. Декстраны
2.3.2. Streptococci - группа А
2.3.3. Streptococcus pneumoniae тип
2.3.4. Streptococcus pneumoniae тип 6В
2.3.5. Streptococcus pneumoniae тип
2.3.6. Streptococcus pneumoniae тип 17F
2.3.7. Streptococcus pneumoniae тип 23F
2.3.8. Haemophilus influenzae тип b
2.3.9. Shigella dysenteriae тип
2.3.10. Shigella flexneri тип 2a
2.3.11. Vibrio cholerae Ol
2.3.12. Candida albicans
2.4. Заключение
Часть 3. Обсуждение результатов
3.1. Синтез гомоолигосахаридов. Исследование реакции терминированной олигомеризации
3.2. Синтез гомоолигосахаридов. Блочный синтез
3.3. Синтез нонасахаридов с различным расположением N-ацетильных групп
3.4. Иммунохимические исследования
Часть 4. Выводы
Часть 5. Экспериментальная часть
Часть 6. Список литературы

Список используемых сокращений

Me - метил
Ph - фенил
Ас - ацетил
Bz - бензоил
Тг - тритил
Phth - фталоил
Z - бензилоксикарбонил
Troc - трихлорэтоксикарбонил
Fmoc - 9-флуоренилметоксикарбонил
DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]-ундец-7-ен
NIS - N-йодсукцинимид
Tf- трифторметилсульфонил
Ру - пиридин
THF - тетрагидрофуран
ПНАГ - поли-Р-(1—>6)-Ы-ацетилглюкозамин
Д-ПНАГ - продукт дез-М-ацетилирования ШТАГ

Часть 1.
ВВЕДЕНИЕ
Бактерии Staphylococcus aureus - один из наиболее часто выявляемых «госпитальных» патогенов, вызывающий большое число заболеваний с высоким уровнем смертности [1]. Именно этот возбудитель является причиной заболеваний у пациентов с медицинскими имплантантами, при которых колонии S. aureus покрывают поверхности имплантантов биопленками, защищающими бактерии от взаимодействия с компонентами иммунной системы. Основным структурным элементом этих биопленок и одним из факторов вирулентности S. aureus является поли-р-(1—>6)-ТчГ-ацетилглюкозамин (ПНАГ) [4]. При щелочном гидролизе ПЛАТ был получен его дезацетилированный аналог (Д-ПНАГ), содержащий лишь около 15% N-ацетидьных групп. В опытах на животных было показано, что иммунизация с использованием Д-ПНАГ, приводит к образованию гораздо большего количества защитных антител по сравнению с нативным ПНАГ [5]. В этих экспериментах антитела к Д-ПНАГ эффективно инициировали уничтожение различных штаммов
S. aureus [5]. Появление защитных антител, способных связываться с Д-ПНАГ, было также обнаружено у пациентов, выздоравливающих после заболеваний, связанных с инфекцией S, aureus [6]. Таким образом, антистафилококковая активность антител против поли-р-(1~-»6)глкжозаминов напрямую связана со степенью N-ацетилирования последних. Однако при получении Д-ПНАГ из нативного ПНАГ с помощью щелочного гидролиза образуется гетерогенная смесь полисахаридов и истинная структура активных эпитопов, то есть фрагментов полисахаридной цепи, ответственных за образование защитных антител, остается неизвестной.
Для установления структуры эпитопов ПНАГ-антигенов, способных инициировать развитие защитного иммунитета, необходимы синтетические олиго-Р-(1—>6)-глюкозамины различной длины, содержащие N-ацетильные группы в заданных остатках глюкозамина.
Целью данной диссертационной работы являлась разработка эффективного метода синтеза олиго-Р-(1 —>6)-глюкозаминов, различающихся длиной цепи (от

стадии испытаний стимулировал дальнейшие клинические анализы. Второй этап фазы I был проведён с участием 133 детей в возрасте от 4 до 5 лет, а в фазе II была проведена иммунизация 1041 ребёнка. Во всех случаях было обнаружено последовательное увеличение анти-Hib титров и значительное возрастание бактерицидной активности сыворотки уже после однократной иммунизации. Отсутствие побочных эффектов у рассмотренной группы детей позволило перейти к испытаниям на целевой возрастной группе, наиболее подверженной инфекциям, связанным с H. influenzae тип Ь, — детям грудного возраста. Трёхкратная вакцинация детей в возрасте 2 меясцев с двухмесячным интервалом, привела к выработке защитных антител, концентрация которых сохранялась как минимум год после последней иммунизации. Заключительная фаза II с участием 1141 грудного ребёнка окончательно подтвердила клиническую эффективность и безопасность данной олигосахаридной вакцины [67]. Результаты испытаний, проведённых с соблюдением всех необходимых норм, доказали, что вакцина на основе синтетических олигосахаридов 69 по своим характеристикам не уступает уже используемым в клинической практике вакцинам. Вакцина на основе лиганда 69 была лицензирована на Кубе в 2003 году под названием «Quimi-Hib» и в настоящее время успешно используется для рутинной профилактической иммунизации около
1,2 миллиона детей ежегодно [8].
Данная вакцина третьего поколения, по сути, стала первой коммерческой вакциной, содержащей синтетический углеводный антиген, а этот успешный опыт показал перспективность разработки конъюгированных вакцин такого типа.
2.3.9. Shigella dvsenteriae тип 1.
Шигеллёз (бациллярная дизентерия) - опасное заболевание, которому особенно подвержены дети в возрасте от 1 до 5 лет в развивающихся странах. Он может быть вызван одним из серотипов, принадлежащих к четырём группам: группа Л ( S. dysenteriae), группа В (S. flexneri), группа С (S. boydii) и группа D (S. sonnei). Разработка вакцины против шигеллёза осложняется тем, что не существует животной модели, в которой бы для заражения использовалась доза живых бактерий, адекватная дозе, вызывающей заражение у людей. При разработке