Комплексы катионных полимерных микросфер с отрицательно заряженными липосомами : формирование, строение и свойства

• Автор: Заборова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 02.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2014
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Модельные липидные мембраны
2.1.1. Липиды
2.1.2. Организация водно-липидных смесей
2.1.2.1. Надмолекулярные липидные структуры
2.1.2.2. Условия образования липидного бислоя
2.1.3. Липосомы
2.1.4. Упаковка ацильных хвостов в липидном бислое
2.1.4.1. Кристаллические фазы Ьр, Гс и их основные характеристики
2.1.4.2. Жидкая фаза Ьа: основные характеристики
2.1.4.3. Ребристая фаза, основные отличия
2.1.5. Фазовые переходы в липидном бислое и факторы, влияющие на температуру фазового перехода
2.1.5.1. Влияние природы полярной головки липида
2.1.5.2. Влияние природы ацильного радикала
2.1.6. Стабильность липосом
2.1.6.1. Химическая стабильность
2.1.6.2. Физическая стабильность
2.1.7. Подвижность липидных молекул
2.1.7.1. Латеральная диффузия
2.1.7.2. Трансмембранная миграция (флип-флоп)
2.2. Применение липосом
2.2.1. Способы доставки лекарственных веществ
2.2.1.1. Пассивная доставка
2.2.1.2. Активная доставка
2.2.2. Недостатки липосомалъных контейнеров
2.3. Комплексы полиэлектролитов с противоположно заряженными липосомами
2.3.1. Взаимодействия между полимером илипосомами
2.3.1.1. Электростатические взаимодействия
2.3.1.2. Гидрофобные взаимодействия
2.3.1.3. Образование водородных связей
2.3.2. Структурные прерстройки в липидном бислое, вызываемые адсорбцией поликатиона
2.3.3. Обратимость взаимодействия поликатионов с отрицательно заряженными липосомами
2.3.4. Механизмы агрегации липосом под действием адсорбированного полиэлектролита
2.3.5. Стабилизация липосом от агрегации под действием поликатиона
2.3.6. Влияние адсорбции полиэлектролитов на липосомы на скорость трансмембранного транспорта низкомолекулярных веществ
2.3.7. Взаимодействие комплексов анионные липосомы-поликатион с клеткамиЗЗ
3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. Используемые реагенты
3.1.1. Фосфолипиды и ПАВ
3.1.2. Полимеры
3.1.3. Низкомолекулярные реактивы
3.1.4. Вода
3.1.5. Структурные формулы используемых веществ
3.2. Объекты исследования
3.2.1. Получение липосом
3.2.2. Получение флуоресцентно меченных липосом, липосом, содержащих ДИЛ и липосом, наполненных солью и лакмусом
3.2.3. Получение полипептидных везикул
3.3. Методы исследования
3.3.1. Динамическое светорассеяние
3.3.2. Электрофоретическая подвижность
3.3.3. Флуориметрия
3.3.4. Спектроскопия
3.3.5. Кондуктометрия
3.3.6. Препаративное центрифугирование
3.3.7. Потенциометрия
3.3.8. Криогенная трансмиссионная электронная микроскопия

3.3.9. Дифференциальная сканирующая калориметрия
3.3.10. Прижизненное окрашивание клеток метилтетразолевым синим
4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ
4.1. Комплексы поликатионных щёток с анионными липосомами
4.1.1. Комплексы с участием КЛ2'/ФХлипосом
4.1.2. Комплексы с участием ФС1'/ФХлипосом
4.2. Структурные перестройки в мембранах липосом, адсорбированных на поверхности поликатионных щёток
4.3. Комплексы, содержащие липосомы с различными наполнителями
4.4. Комплексы поликатионных щёток с рН-чувствительными липосомами
4.5. Определение цитотоксичности комплексов поликатионных щёток с анионными липосомами
4.6. Комплексы анионных липосом с полипептидными везикулами
5. ВЫВОДЫ
6. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
7. СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
3.1. Используемые реагенты
3.1.1. Фосфолипиды и ПАВ
Кардиолипин (KJI), раствор в этаноле с концентрацией 25 мг/мл; пальмитоилолеоилфосфатидилсерин (ПОФС); диолеоилфосфатидилхолин (ДОФХ); дипальмитоилфосфатидилхолин (ДПФХ); дипальмитоилфосфатидилсерин (ДПФС); липиды фирмы Avanti Polar Lipids; меченый флуоресцеин-изоцианатом (ФИТЦ, Ci2Hn05NS) дипальмитоилфосфатидилэтаноламии (ДПФЭ-ФИТЦ) фирма “Sigma” (США), тритон Х-100 “Sigma” (США), липидоподобный ПАВ транс-4,5-дидодецилоксикарбонил-2-морфолиноциклогексанол (ДОП), обладающий
конформационным переходом, синтезирован по методике [131]. Все липиды и ПАВ использовали без дополнительной очистки.
3.1.2. Полимеры
Сферические поликатионные щетки (СК+) синтезировали по методике [132] графт-полимеризацией триметиламиноэтилметакрилатаммоний хлорида на поверхности монодисперсных полистирольных латексных частиц с диаметром 100 нм [133]. Среднее число поликатионных цепей на частицу составляло 600, средняя длина цепей - 65 нм. Концентрация СК+ приведена в молях кватернизованных звеньев в литре раствора.
Блок-сополимер полиаргинина (длина блока х = 60 мономерных звеньев) и полилейцина (длина блока у = 20 мономерных звеньев) ГДДго.
3.1.3. Низкомолекулярные реактивы
В работе использовали хлороформ (СНС13), метанол (СН3ОН), тетрагидрофуран (ТГФ) марки х.ч. “Реахим ” (Россия) без дополнительной очистки, раствор этанола (С2Н5ОН) с концентрацией 95 % “Ферейн” (Россия).
Буфер ТРИС с pH = 7 и pH = 8 готовили, используя трис (трис-(гидроксиметил)-аминометан) марки х.ч., “Реахим ” (Россия).
Буферные растворы с концентрацией 10"2 М и 10'3 М готовили по навеске, pH полученных растворов определяли на pH-метре фирмы «Hanna».