Фармакотоксикологическая оценка экстремофильных дрожжей Yarrowia lipolytica и их использование в качестве средства доставки факторов роста

• Автор: Зылькова, Марина Валерьевна
• Шифр специальности: 06.02.03, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 127 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2 Л Биохимические особенности Уаггом/1а Иро1уйса и их
влияние на применимость этого биологического объекта в микробиологическом производстве
2.2. Адаптация У. Нро1уНса к росту при щелочных значениях pH 14 за счёт модификации системы транспорта метаболитов через внешнюю мембрану
2.3. Исследования физиологических реакций У. Нро1уНса при 20 росте в щелочных условиях методами протеомики
2.4. Универсальные механизмы ответа У. ИроЫ1са на 30 различные виды стресса
2.4.1. Функционирование цепи переноса электронов У. Иро1уПса при 36 стрессовых воздействиях
2.4.2. Альтернативная оксидаза дыхательной цепи, как фактор 39 адаптации У. Иро1уйса к стрессовым воздействиям
2.4.3. Изменения морфологии клеток У Иро1уйса при адаптации к 42 стрессовым воздействиям
2.4.4. Цитологические особенности У. ЧрсЯуйса при ответе на
тепловой шок
2.4.5. Цитологические особенности У. Нро1уйса при ответе на
химический стресс
3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
4 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Изучение острой и субхронической токсичности кормовых 57 добавок на основе рыбной муки и У. НроІуНса
4.2 Изучение раздражающего и аллергизирующего действия 64 кормовой добавки на основе рыбной муки и У. Ііроіуйса

4.3 Биологические испытания на модели мышей опытного 67 образца кормовой добавки, полученной на основе У. Ііроіуйса путём культивирования на средах различного состава
4.4 Исследование активности промотора гена УПАС методом 72 транскрипционных репортёров с использованием гена La.cZ
4.5 Создание рекомбинантных продуцентов ОНЛН свиньи
5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
6 ВЫВОДЫ
7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список использованных сокращений
АЕР (ХРИ2)

ЄІсХАс

МАЕ.БІ-ТОЕ

- щелочная секреторная эндопротеиназа К Нро1уНса и ее ген;
- Всемирная организация по пищевым продуктам;
- Ы-ацетилглюкозамин;
- соматолиберин, релизинг-фактор гормона роста;
- идентификация белков по спектру масс триптических пептидов, определяемых с помощью масс-спектроскопии;
- физиологический раствор, забуференный фосфатом натрия, pH 7,2;
- физиологический раствор, забуференный фосфатом натрия, pH 7,2, содержащий детергент Туееп-20 в концентрации 0,03%;
- буфер для электрофореза нуклеиновых кислот на основе Трис, уксусной кислоты и ЭДТА, pH 8,3;
- 3,3',5,5'-тетраметилбензидин, хромогенный субстрат пероксидазы, дающий при окислении водорастворимый продукт;
- потенциал-зависимый порин внешней мембраны митохондрий;
- белково-витаминный концентрат (на основе сухой биомассы К Нро1уИса);
-Дитиотрейтол;
- этилендиаминтетрауксусная кислота, хелатор двух- и поливалентных катионов;
- полиакриламидный гель;
- персульфат аммония.

Время пвкубашш, мин
Рис. 6. Перекрёстная устойчивость Г. Иро1уНса и? экспоненциальной фазы роста в условиях этанольного стресса (15%).
1- без предобработки (контроль); 2 - предобработка нелетальной дозой Н202 (0.5 мМ, 60 мин); 3 - тепловая предобработка (37°С, 60 мин).
В работах (Ве1агг1 Т., 1991; МагсЫег в. й а1., 1993) выдвинута концепция о существовании универсального центра координации стрессовых ответов БТЯЕ, активация которого ответственна за скорость и направление индукции конкретных защитных механизмов. Однако, в составе 8ТКЕ транскрибируется ряд универсальных генов, функция которых состоит в комплексной защите клетки от стрессов различной природы. Согласно данным (Ве1агг1 Т., 1991), одним из существенных элементов запуска 8Т11Е у пекарских дрожжей оказалась протеинкиназа А, ответсвенная за деградацию ряда белков антистрессового ответа. В работе (Пба Н., 1988) установлено, что существует чёткая зависимость между термотолерантностыо культуры и внутриклеточной активностью цАМФ-зависимой протеинкиназы. Дрожжи со сниженной активностью протеинкиназы А отличаются повышенной устойчивость к тепловому шоку, а мутанты с высокой конститутивной экспрессией этого гена, напротив, максимально уязвимы для стрессового воздействия.
Существенной фундаментальной проблемой из области механизма уникальной антистрессовой устойчивости У Иро1уйса является понимание изменений в возможноятсх аэробного метаболического потенциала этого