Экспрессия компонентов донервной серотонинергической системы в эмбриогенезе шпорцевых лягушек и морских ежей

• Автор: Никишин, Денис Александрович
• Шифр специальности: 03.03.01, 03.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 103 с. : ил.

Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель и задачи исследования
Научная новизна
Теоретическое и практическое значение
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Донервные трансмиттеры
Состав серотонинергической системы в нервных клетках
Система синтеза
Система везикулярного транспорта
Рецепторы
Система обратного захвата
Система деградации
Функции серотонина в раннем донервном эмбриогенезе
Оогенез
Деления дробления
Межбластомерные взаимодействия
Функции серотонина в позднем донервном эмбриогенезе
Гаструлнция
Лево-правая асимметрия
Ресничная моторика
Механизмы донервных эффектов серотонина
Серотонин в эмбриогенезе
Динамика серотонина в раннем развитии
Локализация серотонина в клетках ранних эмбрионов
Компоненты серотонинергической системы в эмбриогенезе
Рецепторы серотонина
Транспортеры серотонина
Ферменты синтеза и деградации серотонина
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Реактивы, использованные в работе
Лабораторное оборудование

Экспериментальные процедуры
Получение и фиксация проб
Обратная транскрипция и ПЦР
Молекулярное клонирование
Гибридизация in situ
Иммуногистохимическое выявление серотонина
РЕЗУЛЬТАТЫ
Экспрессия и функциональная активность компонентов серотонинергической системы в раннем развитии морских ежей
Экспрессия компонентов серотонинергической системы в нормальном развитии Xenopus
Рецепторы
Т ранспортеры
Ферменты синтеза и деградации
Уровень и динамика экспрессии компонентов серотонинергической системы в раннем развитии Xenopus
Пространственное распределение мРНК компонентов серотонинергической системы в ранних эмбрионах Xenopus
Экспрессия компонентов серотонинергической системы на уровне трансляции
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений
АТФ - аденозинтрифосфат (ATP, adenosine triphosphate)
АТФаза - аденозинтрифосфатаза (ATPase, adenosine triphosphatase)
АШ - анимальная шапочка ВШ - вегетативная шапочка
ГТФ - гуанозинтрифосфат (GTP, guanosine triphosphate)
ГТФаза - гуанозинтрифосфатаза (GTPase, guanosine triphosphatase)
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота (DNA, deoxyribonucleic acid) ДНКаза - дезоксирибонуклеаза (DNase, deoxyribonuclease)
ЕА - единица активности (U, enzyme unit)
ИС - информосомы
кб - килобаз (kb, kilo base pairs)
кДНК - комплементарная ДНК (cDNA, complementary DNA)
ЛПА - лево-правая асимметрия М3 - маргинальная зона
мРНК - матричная РНК (mRNA, messenger RNA)
ОТ-ПЦР - обратно-транскрипционная ПЦР (RT-PCR, reverse transcription PCR)
пн - пара нуклеотидов (bp, base pair)
ПРС - полирибосомы
ПЦР - полимеразная цепная реакция (PCR, polymerase chain reaction) РНК - рибонуклеиновая кислота (RNA, ribonucleic acid)
РНКаза - рибонуклеаза (RNase, ribonuclease)
СЭК - субэпителиальные клетки УТФ - уридинтрифосфат (UTP, uridine triphosphate) цАМФ - циклический аденозинмонофосфат (cAMP, cyclic adenosine monophosphate)
ЦТФ - цитидинтрифосфат (СТР, cytidine triphosphate)
ЭК - эпителиальные клетки
проводились с использованием стандартных методик (Бузников, Подмарев,
Фиксация проб. Для последующего выделения тотальной РНК образцы фиксировали в RNAlater и хранили при 4°С до 1 недели. Для проведения гибридизации in situ зародыши фиксировали в растворе MEMFA (100 мМ MOPS, 2 мМ EGTA, 1 мМ MgS04, 4% формальдегид) в течение 1 ч при комнатной температуре или ночь при 4°С, после чего переводили в 96% этанол и хранили при -20°С. Для последующего иммуногистохимического выявления серотонина эмбрионы морских ежей фиксировали в 4% параформальдегиде, отмывали в IX PBS, переводили в метанол и хранили при -20°С.
Обратная транскрипция и ПЦР
Выделение тотальной РНК проводили гуанидин-изотиоцианатным методом. Пробы гомогенизировали пестиком в 1 мл TRI Reagent, добавляли 200 мкл хлороформа, инкубировали 10 мин при комнатной температуре и периодическом вортексировании и центрифугировали при 14000 g в течение 20 мин. Верхнюю водную фазу отбирали, добавляли 500 мкл изопропанола,
Рисунок 4. Схема получения проб для исследования пространственного распределения экспрессии генов в бластулах Хепорт (стадия 9)
АШ - анимальная шапочка; М3 - маргинальная зона; ВШ - вегетативная шапочка, ЭК -эпителиальные клетки; СК - субэпителиальные клетки.
1975).