+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Исследование структурной организации и экспресси новых генов антимикробных пептидов злаков

  • Автор:

    Уткина, Любовь Леонидовна

  • Шифр специальности:

    03.02.07

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2011

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    139 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

Оглавление
Благодарности
Список сокращений
1 Введение
1.1 Актуально сть темы
1.2 Цели и задачи работы
1.3 Научная новизна
1.4 Практическая значимость
2 Обзор литературы
2.1 Антимикробные пептиды
2.1.1 Тионины
2.1.1.1 Структура
2.1.1.2 Функции и антимикробные свойства
2.1.1.3 Структура генов, экспрессия и локализация
2.1.1.4 Экспрессия в трансгенных растениях
2.1.2 Дефензины
2.1.2.1 Структура
2.1.2.2 Функции и антимикробные свойства
2.1.2.3 Структура генов, экспрессия и локализация
2.1.2.4 Экспрессия в трансгенных растениях
2.1.3 Липид-переносящие белки
2.1.3.1 Структура
2.1.3.2 Функции и антимикробные свойства
2.1.3.3 Структура генов, экспрессия и локализация
2.1.3.4 Экспрессия в трансгенных растениях
2.1.4 Гевеиноподобные антимикробные пептиды
2.1.4.1 Структура
2.1.4.2 Функции и антимикробные свойства
2.1.4.3 Структура генов, экспрессия и локализация
2.1.4.4 Экспрессия в трансгенных растениях
2.1.5 Ноттиноподобные пептиды
2.1.6 Макроциклические пептиды (циклотиды)
2.1.7 Антимикробные пептиды, содержащие четыре остатка цистеина
2.1.7.1 МВР
2.1.7.2 УЬТІ
2.1.7.3 МІАМР2
2.1.7.4 ІЬ-АМРя
2.2 Процессинг полипептидных предшественников
2.2.1 Гидролиз

2.2.2 Другие посттрансляционные модификации
2.3 Систематика рода Triticum L. и происхождение полиплоидных пшениц
2.3.1 Систематика рода Triticum L
2.3.2 Происхождение полиплоидных пшениц
3 Материалы и методы
3.1 Материалы
3.1.1 Объекты исследования '
3.1.2 Реактивы и материалы
3.1.3 Бактериальные штаммы и плазмидные векторы
3.1.4 Наборы реактивов
3.1.5 Растворы
3.1.6 Грибы
3.1.7 Среды для культивирования клеток E
3.1.8 Праймеры
3.2 Методы
3.2.1 Установление структуры к ДНК, кодирующей предшественники
антимикробных пептидов
3.2.1.1 Выделение РНК
3.2.1.2 Синтез первой цепи кДНК
3.2.1.3 ПЦР-амплификация
3.2.1.4 Выделение ДНК из агарозного геля
3.2.1.5 Лигирование
3.2.1.6 Приготовление компетентных клеток для электропорации
3.2.1.7 Электротрансформация клеток K. coli
3.2.1.8 Анализ рекомбинантных плазмид
3.2.1.9 1 Выделение плазмидной ДНК
3.2.1.10 Секвенирование ДНК
3.2.1.11 Определение нуклеотидных последовательностей предшественников
пептидов, получение полноразмерной кДНК
3.2.2 Поиск гомологов генов 4-Cys и Ю-Cys пептидов пшеницы у представителей семейств Triticum, Aegilops и Leymus
3.2.2.1 Выделение геномной ДНК
3.2.2.2 Получение кодирующей части генов
3.2.3 Экспрессия рекомбинантных пептидов в клетках E
3.2.3.1 Синтез гена и получение экспрессионного вектора
3.2.3.2 Получение рекомбинантного полипептида
3.2.3.3 МАЛДИ-времяпролетная масс-спектрометрия
3.2.3.4 N-концевое секвенирование белковых молекул
3.2.4 Определение изменения уровня экспрессии генов 4-Cys пептидов под действием биотических и абиотических стрессовых факторов методом ОТ-ПЦР
3.2.4.1 Заражение проростков
3.2.4.2 Абиотический стресс
3.2.4.3 ОТ-ПЦР

3.2.5 Определение антимикробной активности пептидов
3.2.6 Компьютерный анализ последовательностей
3.2.7 Выделение антимикробных пептидов из зерновок злаковых
3.2.8 Определение содержания элементов вторичной структуры пептидов
3.2.9 Определение антимутагенной активности пуротионина Тк-АМР-ВР и водных экстрактов растений
4 Результаты и обсуждение
4.1 Гены 4-Cys пептидов
4.1.1 Исследование структуры генов, кодирующих предшественники пептидов Тк-АМР-Х1 и Тк-АМР-Х2
4.1.1.1 Клонирование кДНК, кодирующей 4-Cys пептиды, и установление
структуры их предшественников
4.1.1.2 Анализ последовательностей кДНК
4.1.1.3 Клонирование геномной ДНК, кодирующей 4-Cys пептиды
4.1.1.4 Установление сайтов специфического протеолитического расщепления
предшественников 4-Cys пептидов
4.1.1.5 Аминокислотные последовательности 4-Cys пептидов
4.1.2 Влияние биотических и абиотических стрессовых факторов на уровень экспрессии генов 4-Cys пептидов
4.1.3 Поиск генов-гомологов 4-Cys пептидов у разных представителей семейства злаковых
4.1.4 Гетерологичная экспрессия гена пептида Тк-АМР-ХЗ в клетках E
4.2 Гены 10-Cys пептидов
4.2.1 Выделение и определение структуры пептида LAMP из семян колосняка песчаного Leymus arenarius
4.2.2 Гетерологичная экспрессия гена пептида LAMP в клетках E. coli и тестирование его антифунгальной активности
4.2.3 Исследование структуры генов, кодирующих предшественники 10-Cys пептидов злаковых
4.2.3.1 Клонирование кДНК, кодирующей пептид LAMP, и установление
структуры его предшественника
4.2.3.2 Клонирование геномной ДНК, кодирующей пептиды WAMPs
4.2.4 Идентификация генов-гомологов wamp у представителей родов Triticum и Aegilops
4.3 Определение антимутагенного действия пуротионина Тк-АМР-ВР на клетки человека
5 Выводы
6 Список литературы

2.1.4.2 Функции и антимикробные свойства
Функция гевеина не известна, но было показано, что в экспериментах in vitro он обладает слабой антифунгальной активностью (Van Parijs, 1991). Было выдвинуто предположение, что гевеин, как и гомологичные ему хитин-связывающие пептиды, участвует в защите растений от патогенов, так как хитин - один из основных компонентов клеток грибов, насекомых и нематод, который отсутствует у растений.
Гевеиноподобные пептиды подавляют ряд фитопатогенных грибов и грамположительных бактерий in vitro, при этом их активность падает в присутствии двувалентных катионов (Broekaert et al., 1994; Broekaert et al., 1997).
Наиболее изученным гевеиноподобным. пептидом является, пептид Ас-АМР2, выделенный из амаранта. Однако, его антимикробная активность существенно снижается при концентрации двувалентных катионов в среде выше 1 мМ. В среде, содержащей-1 мМ СаС12 и 50 мМ KOI, этот пептид не оказывает никакого влияния на. рост грибов в концентрации до 100 мкг/мл, хотя в среде с низкой ионной силой он угнетает рост грибов в концентрации, ниже 10 мкг/мл (Broekaert. et al., 1997).
2.1.4.3 Структура генов, экспрессия и локализация
Ген гевеина экспрессируется в листьях и стеблях, но не экспрессируется в корнях или проростках. При этом уровень транскриптов гевеина возрастает при повреждении растения или обработке абсцизовой кислотой (Raikhel et al., 1993).
Предшественник гевеина состоит из N-концевой сигнальной
последовательности, гевеинового домена и 144-амино кислотного С-
концевого домена (Broekaert et al., 1990) (рис. 10). Этот домен, который
расщепляется в ходе посттрансляционных модификаций, гомологичен
белкам семейства PR-4 из табака. кДНК гевеиноподобного пептида из

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.487, запросов: 967