Характеристика грибов рода Candida как ассоциантов в микробиоценозах тела человека

• Автор: Капустина, Ольга Александровна
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 159 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГРИБОВ РОДА CANDIDA И ОСОБЕННОСТИ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С
МИКРООРГАНИЗМАМИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)
1.1. Факторы патогенности грибов рода Candida
1.2. Факторы персистенции грибов рода Candida
1.3. Антибиотикорезистентность грибов рода Candida
1.4. Взаимодействие бактерий и грибов рода Candida
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Выделение и идентификация грибов рода Candida
2.2. Методы определения факторов патогенности грибов рода Candida
2.3. Методы определения факторов персистенции грибов рода Candida
2.4. Методика определения способности грибов рода Candida к биопленкообразованию
2.5. Метод определения чувствительности грибов рода Candida к антимикотикам
2.6. Методика обнаружения генов, кодирующих резистентность к антимикотикам грибов рода Candida
2.7. Выделение и идентификация бактерий рода Lactobacillus spp.
и Enterococcus spp.
2.8. Методика обнаружения генов, кодирующих факторы вирулентности бактерий рода Enterococcus spp.
2.9. Методика совместного культивирования грибов рода Candida и бактерий родов Lactobacillus spp. и Enterococcus spp.
2.10. Методы статистической обработки результатов
ГЛАВА 3. ВИДОВОЙ СОСТАВ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗНЫХ БИОТОПОВ ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА В НОРМЕ
3.1. Видовой состав грибов рода Candida, выделенных в норме
3.2. Биологические свойства грибов рода Candida, выделенных
в норме
ГЛАВА 4. ВИДОВОЙ СОСТАВ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗНЫХ БИОТОПОВ ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ПРИ ИНФЕКЦИОННОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ И ДИСБИОЗЕ
4.1. Видовой состав грибов рода Candida
4.2. Биологические свойства грибов рода Candida
4.3. Факторы персистенции грибов рода Candida

ГЛАВА 5. АНТИБИОТИКОРЕЗИСТЕНТНОСТЬ ГРИБОВ РОДА
CANDIDA, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗНЫХ БИОТОПОВ ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА ПРИ ИНФЕКЦИОННО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ И ДИСБИОЗЕ
ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИ-
ЧЕСКИХ СВОЙСТВ ГРИБОВ РОДА CANDIDA, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ РАЗНЫХ БИОТОПОВ
ГЛАВА 7. ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕЖМИКРОБНЫХ
ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ ГРИБОВ РОДА CANDIDA И БАКТЕРИЙ РОДОВ LACTOBACILLUS И ENTEROCOCCUS
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ
ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы
Дрожжеподобные грибы рода Candida, являясь комменсалами, обитающими в пищеварительном или/и дыхательном и урогенитальном трактах, на поверхности кожи, могут вызывать развитие заболеваний (Мамедова Л.Р., Караев З.О., 2010; Кузьмина Д.А. с соавт., 2011). Грибы рода Candida в биотопах тела человека выживают в условиях постоянного воздействия факторов врожденного и адаптивного иммунитета, используя механизмы супрессии/нейтрализации компонентов антимикробной защиты макроорганизма. Так, у грибов, выделенных при дисбиозе кишечника, вагинальном кандидозе и хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях придатков матки, выявлены антилизоцимная, антикомплементарная, антилактоферриновая активности (Валышев A.B. с соавт., 2003; Рафикова Л.М., 2009), а у грибов, колонизирующих полость рта, - антиинтерфероновая активность (Четвертнова Г.А., Климова Т.Н., 2008).
Вместе с тем, среди Candida spp. встречаются штаммы, устойчивые к современным антимикотикам; данная устойчивость Candida spp. может проявляться на разных уровнях: генетическом, клеточном, популяционном, видовом и в настоящее время приобретает все большую значимость.
Присутствуя в биоценозе, грибы рода Candida взаимодействуют с другими видами условно-патогенных микроорганизмов и представителями нормальной микрофлоры тела человека. В микробных ассоциациях между разными видами микроорганизмов возникают неоднозначные взаимоотношения, что может оказать существенное влияние, как на колонизацию слизистой, так и на течение инфекционного процесса (Долгушина В.Ф., Долгушин И.И., 2004; Karagozov I. et al., 2004). В подобных ситуациях многими исследователями (Вахитов Т.Я., 2007; Семенов A.B., 2009; Barefoot S.F. et al., 1994; Meams-Spragg A., 1998; Yan L., 2003; Dubuis Ch., Haas D., 2007) существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и

Затем проводили идентификацию выделенной культуры гриба, определяя тип филаментации и наличие хламидоспор при посеве на рисовый агар или Хламидоспорагар (Дагестанский НИИПС, г. Махачкала). Для этого проводили прерывистый штриховой посев, часть посева накрывали фламбиро-ванным покровным стеклом. Посевы инкубировали при 22° С в темном месте в течение 3-4 дней (Реброва Р.Н., 1989). Выявление хламидоспор позволяло идентифицировать культуру как С. albicans.
У культур, не образовавших хламидоспоры, изучали ферментативную активность путем посева чистой культуры в пептонную воду с индикатором Андреде, содержащую ряд углеводов: лактозу, глюкозу, мальтозу, сахарозу. Посевы инкубировали при 37°С, учитывали результат через 48 часов и 7 суток (Реброва Р.H., 1989).
2.2. Методы определения факторов патогенности грибов
рода Candida
Гемолитическую активность определяли по стандартной методике (Биргер М.О., 1982). На 5% кровяной агар засевали суточную культуру грибов. После 24 часов инкубации при 37°С проводили учет результатов по наличию вокруг колоний прозрачной зоны (зоны полного просветления среды).
Каталазную активность определяли по методике М.О. Биргера (1982). На предметное стекло наносили каплю 10% перекиси водорода, в нее стеклянной палочкой вносили культуру гриба и растирали круговыми движениями. На наличие фермента указывало выделение пузырьков газа.
Изучение способности микроорганизмов к продукции лизоцимподоб-ных ферментов проводили по методу A.A. Ленцнера с соавт. (1975). Для этого выросшие бактериальные клетки тест-штамма Micrococcus luteus АТТС 15307 обрабатывали хлороформом в течение 60 минут, суспендировали в физиологическом растворе до оптической плотности 0,5 единиц на фотометре «Домбиплейт» («Элми», Латвия, X = 462 нм) в стандартных 96-луночных планшетах. Затем к 9,0 мл 0,7% агара добавляли 1,0 мл суспензии тест-
штамма и разливали в чашки Петри. После застывания чашки подсушивали