+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Экспрессия консервативных антигенов вируса гриппа A в растениях на поверхности химерных частиц ВТМ : иммуногенные и протективные свойства кандидатных вакцин

  • Автор:

    Петухова, Наталья Витальевна

  • Шифр специальности:

    03.02.02

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2013

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    160 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

Содержание:
Список сокращений
Введение
Глава 1. Химерные частицы ВТМ как основа для создания «универсальной» вакцины против вируса гриппа А (обзор литературы)
Грипп: прошлое, настоящее, будущее
Вирус гриппа: структура и морфология
Антигенная вариабельность и эволюция вируса гриппа А
Молекулярные детерминанты патогенности вируса гриппа А
Иммунный ответ на гриппозную инфекцию
Вакцины для контроля и профилактики вируса гриппа А
Новые технологии производства противогриппозных вакцин
Промежуточные подходы к улучшению существующих вакцин
Вакцины нового поколения против вируса гриппа
«Универсальная» вакцина против вируса гриппа
Консервативные эпитопы гемагглютинина вируса гриппа А
Эктодомен белка М2 вируса гриппа А (М2е-эпитоп)
Химерные вирионы в биотехнологии растений
Основные принципы создания химерных вирусных частиц
Химерные частицы вируса табачной мозаики (ВТМ)
Глава 2. Материалы и методы
Реактивы
Методы исследования
Экспрессия белка в E.coli при помощи микроиндукции
Полимеразная цепная реакция (ПЦР)
ПЦР с перекрывающимися фрагментами
Конструирование субклонов для вирусных векторов и оптимизация нуклеотидных последо-
вател ь н осте йэпитопов
Клонирование рекомбинантных вирусных векторов TMV-M2e
Клонирование рекомбинантного вирусного вектора TMV-fp
Выделение и анализ плазмидной ДНК
Выделение плазмидной ДНК
Электрофорез в агарозном геле
Расщепление ДНК рестрикционными эндонуклеазами
Лигирование ДНК
Агроинфильтрация растений

Условия выращивания экспериментальных растений
Трансформация клеток Agrobacteratm tumefaciens
Агроинфильтрация листьев Nicotiana benthamiana
Выделение и анализ белков
Выделение белков из растений
Электрофоретический анализ белков в денатурирующем полиакриламидном геле
(ПЛАТ)
Вестерн-блот анализ
Выделение препарата вируса
Электронная микроскопия
Использование антител, коньюгированных с золотом
Анализ РНК из вирусных частиц и зараженных растений
Выделение РНК методом фенольной дспротеинизации вирусных частиц
Выделение тотальной РНК из листьев растений
Обратная транскрипция и ПЦР-анализ
Изучение «конкурентоспособности» рекомбинантных вирусов TMV-M2e-ser
и TMV-M2e-ala
Определение круга хозяев рекомбинантных вирусов TMV-M2e
Метод непрямого иммуноферментного анализа (ИФА)
Имунизация животных
Синтетические пептиды
Определение титров специфических сывороточных антител к синтетическим
пептидам М2е
Взаимодействие антител с белком М2 на поверхности эпителиальных клеток
Определение репродукции вируса в легких мышей
Вирусы гриппа А и заражение мышей
Статистическая обработка данных
Глава 3. Результаты
Создание экспериментальной системы презентации М2е-эиитоиа и fusion-пептида в составе
генома TMV-U
Экспрессия слитых белков DHFR-M2e и DHFR-fp в E. coli и получение соответствующих антисывороток
Клонирование РНК 7 (М) вируса гриппа А в бинарный вектор для экспрессии в растениях

Характер развития вирусной инфекции при заражении растений Ысоишю ЬемИат'шпа рекомбинантными вирусами
Анализ экспрессии модифицированного БО ВТМ
Анализ экспрессии БО ВТМ, содержащего М2е-эпитоп вируса гриппа А
Анализ экспрессии БО ВТМ. содержащего (шпон-пептид вируса гриппа А (БО-Гр)
Динамика накопления рекомбинантных вирусов ТМУ-М2е-ьег и ТМУ-М2е-а1а в растениях
ШсоНапа Ьеп/капиапа
Анализ развития инфекции рекомбинантных вирусов ТМУ-М2е в растениях, обеспечивающих гиперчувствительный ответ
Анализ круга растений-хозяев, у которых рекомбинантные вирусы ТМУ-М2е вызывают
системную инфекцию
«Конкурентоспособность» рекомбинантных вирусов ТМУ-М2е-зег и ТМУ-М2е-а1а между
собой
Стабильность рекомбинантных вирусных геномов
Характеристика химерных вирусных частиц
Электронная микроскопия химерных вирусных частиц
Соотношение антител к эпитопу (М2е) и носителю (БО ВТМ) в сыворотке, полученной при
иммунизации мышей химерными частицами ТМУ-М2е
Иммуногенность ТМУ-М2е-аег и ТМУ-М2е-а1а доя мышей
Взаимодействие сывороток, полученных при иммунизации мышей химерными частицами ТМУ-М2е, с белком М2 на поверхности эпителиальных клеток, зараженных
вирусом гриппа
Определение репродукции вируса в легких мышей, иммунизированных ТМУ-МЗе-яег и
ТМУ-М2е-а1а
Протективное действие кандидатных вакцин ТМУ-М2е-яег и ТМУ-М2е-а1а при заражении
мышей гомологичным и гетерологичным вирусами гриппа А
Глава 4. Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы

акций. Растительная вакцина не вызывала существенного увеличения уровня натуральных сывороточных антител к углеводным компонентам клеток растений, входящих в состав вакцины (Landry et al., 2010).
Многообещающим достоинством получения гриппозных ВПЧ в клетках растений, особенно перед угрозой пандемии, является высокая продуктивность и быстрота масштабирования процесса. Вакцину на основе ВПЧ можно произвести в растениях в течение 21 дня (D’Aoust el al., 2010). Высокий уровень синтеза рекомбинантного белка достигается в течение 5-11 дней после агроинфильтрацни листьев Nicotiam benlhamiana (Marillonnet et al.. 2005; Sainsbury and Lomonossoff, 2008).
ВПЧ вируса гриппа представляют собой оригинальную структуру, подобную нативным вирусным частицам, содержащую липидную оболочку и связанные с мембраной поверхностные гликопротеины. К основным достоинствам ВПЧ-вакцин по сравнению с традиционными современными гриппозными вакцинами можно отнести следующие особенности; 1) время производства ВПЧ-вакцины сведено к минимуму (в пределах одного месяца); 2) ВПЧ сохраняют нативную структуру белков, сравнимую с белками дикого штамма вируса гриппа; 3) для получения ВПЧ-вакцины не используются куриные эмбрионы; 4) при получении ВПЧ-вакцины не применяется инфекционный пли высокопатогенный штамм вируса гриппа; 5) быстрый и гибкий процесс масштабирования технологического процесса получения ВПЧ-вакцин. Неинфекционные гриппозные ВПЧ после интраназального или внутримышечного введения могут обеспечивать защиту не только от гомологичных, но и дрейфовых вариантов, а также гетерологичных вирусов гриппа типа А. ВПЧ индуцируют как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ, играющий ведущую роль для расширения субтипического спектра защиты. Таким образом, гриппозные ВПЧ представляют собой перспективную и привлекательную стратегию для разработки безопасной и эффективной вакцины и контроля над распространением, как сезонного, так и пандемического вируса гриппа.
Протеосомы. С помощью генно-инженерных технологий можно создать специфические наноструктуры, которые будут содержать целевой антиген, связанный с носителем, представляющим собой биологические макромолекулы. Так называемые протеосомы (белковый комплекс примерно 30-60 нм в диаметре, который несет антиген на своей поверхности) могут быть получены путем процесса самосборки таких макромолекул. Несмотря на то, что многие авторы относят такие структуры к вирусоподобным частицам, считать их ВПЧ представляется не вполне корректно, так как в отличие от ВПЧ, протеосомы сформированы на основе вирусного белка-носителя гетерологичной природы по сравнению с антигеном (Sedova ai al., 2012). Протеосомы чаще всего образованы из вирусных белков оболочки (например, аденовирусных пентонов (Fender et а!., 1997); белка L1 вируса папилломы человека (Matic et al., 2011); корового антигена НВс вируса гепатита (De Filette et al.. 2008b)).

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.152, запросов: 967