Изучение воздействия рекомбинантного интерлейкина-1β человека на заживление осложненной кожной раны и язвы желудка

• Автор: Александров, Георгий Вячеславович
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 153 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Белки семейства интерлейкина-1
1.2. Механизмы заживления кожной раны в норме и при патологии,
роль цитокинов в процессе репарации
1.3. Механизмы защиты и заживления слизистой оболочки желудка,
роль цитокинов в этих процессах
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Экспериментальные животные
2.2. Оперативные вмешательства
2.3. Использованные препараты
2.4. Методы исследования
2.5. Экспериментальные протоколы
Глава 3. РАЗРАБОТКА И ОПИСАНИЕ МОДЕЛИ ОСЛОЖНЕННОЙ
КОЖНОЙ РАНЫ МЫШИ
3.1. Подбор дозы гидрокортизона, вызывающей достоверное
снижение интенсивности заживления раны
3.2. Изучение динамики заживления кожной раны, осложненной
введением гидрокортизона
3.3. Изучение морфологических изменений в ране под действием
гидрокортизона

3.4. Оценка иммунологических параметров и массы тела
экспериментальных животных
3.5. Обсуждение результатов
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ РАНОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО 1Ь-1р ЧЕЛОВЕКА, НА МОДЕЛИ ОСЛОЖНЕННОЙ КОЖНОЙ РАНЫ
4.1. Изучение динамики заживления осложненной кожной раны, при ежедневном нанесении мазевой формы рекомбинантного 1Ь-1(3
4.2. Изучение морфологических изменений в осложненной ране, под действием мазевой формы рекомбинантного 1Е-1 (3
4.3. Оценка иммунологических параметров и массы тела экспериментальных животных
4.4. Обсуждение результатов
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ ЯЗВОЗАЖИВЛЯЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО 1Ь-1 (3 НА МОДЕЛИ ЯЗВЫ ЖЕЛУДКА КРЫСЫ
5.1 Подбор дозы 1Ь-1Р оказывающей значительный эффект на
заживление язвы желудка
5.2 Морфологическое исследование язвенных поражений желудка
5.3 Подбор эффективной схемы введения рекомбинантного ГБ-Щ
человека в дозе 100нг/мл
5.4 Анализ лейкоцитарной инфильтрации язвы желудка при
трехкратном введении 1Б-1 р в дозе 100нг/мл
5.5 Анализ лейкоцитарной формулы крови
5.6 Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

ВВЕДЕНИЕ
Процесс репарации любой эпителиальной ткани опосредован двумя основными механизмами: репаративным (процесс восстановления целостности эпителиального слоя и подлежащей соединительной ткани) и иммунным (процесс подавления попавших в рану патогенов). Эти механизмы тесно связаны между собой, и в их регуляции участвует большое количество различных медиаторов, значительная часть которых является цитокинами (С1агк Я., 1996). Цитокины - это гетерогенная группа низкомолекулярных полипептидных медиаторов межклеточного взаимодействия секретируемых различными типами клеток и выполняющих регуляторные функции. Для цитокинов характерны плейотропность и взаимозаменяемость биологического действия, передача сигнала за счет взаимодействия со специфическими рецепторами, формирование цитокиновых сетей - когда один полипептид регулирует продукцию целого ряда других цитокинов. Связываясь с рецепторами на поверхности клеточной мембраны, цитокины регулируют активацию, дифференцировку, пролиферацию и синтетическую активность клеток-мишеней в норме и при различных патологических состояниях (Кетлинский С., Симбирцев А., 2008). Интерлейкин-1 - один из самых широко изученных полифункциональных цитокинов, был открыт в конце 20 века. Семейство интерлейкина-1 (1Ь-1) насчитывает 11 гомологичных белков, при этом в научной литературе под именем 1Ь-1 чаще всего фигурируют два функционально близких члена семейства - 1Ь-1а и 1Ь-1 р, обладающие сходной биологической активностью. К настоящему моменту известно более пятидесяти различных биологических эффектов 1Ь-1, но, безусловно, важнейшей функцией 1Ь-1 является активация воспалительного процесса на местном и системном уровнях (ЭтагеПо С., 2010; Симбирцев А., 2011). Помимо провоспалительной активности 1Ь-1 выполняет целый ряд других важнейших функций, в том числе участвует в регуляции репаративных процессов, которые тесно ассоциированы с иммунным ответом.
мигрирующие фибробласты, эндотелиальные клетки. Фибробласты грануляционной ткани активно продуцируют внеклеточный матрикс, состоящий из коллагенов, фибронектина и ряда других белков, и необходимый для восстановления собственной пластинники слизистой желудка и под слизистой основы (Cotran R. et al., 1999). Грануляционная ткань разрастается с краев, к середине язвы и в итоге целиком заполняет язвенный дефект. Ангиогенез в грануляционной ткани является важнейшим процессом в восстановлении слизистой оболочки желудка. Клетки эндотелия мигрируют в полость язвы в составе грануляционной ткани, образуют сосуды соединяющиеся анастомозами, продуцируют базальную мембрану, в результате чего образуется развитая капиллярная сеть. Активный ангиогенез и поддержание адекватного кровяного давления в области поражения являются необходимым условием заживления язвы (Hirose Н. et al., 1991). Важную роль в этих процессах играет активность индуцибельной N0 синтазы (iNOS), которая обеспечивает продукцию оксида азота клетками эндотелия. Экспериментально продемонстрировано значительное снижение количества капилляров, а также снижение кровяного давления и интенсивности заживления язв при использовании блокатора iNOS (Konturek S. et al., 1993). Восстановление желез желудка, происходит за счет специализированных линий стволовых клеток, которые прорастают в грануляционную ткань из крипт интактной слизистой оболочки, формируют трубчатые структуры и в конечном итоге образуют новые железы (Wright N. et al., 1990; Hoffmann W., 2008). По мере развития грануляционной ткани происходит ее созревание: временный внеклеточный матрикс заменяется на богатую коллагеном рубцовую соединительную ткань (Calabro A. et al., 2004). Существенную роль в развитии грануляционной ткани язвы желудка играют bFGF, VEGF, PDGF, TGFpi которые продуцируются макрофагами, фибробластами и другими клетками, находящимися в области поражения и входящими в состав грануляционной ткани (Tominaga К. et al., 1997; Kimura Т. et al., 1999; Tamawski A. et al., 2001). Эффекты этих ростовых факторов на развитие грануляционной ткани достаточно разнообразны, так