Взаимодействие живых клеток с флуоресцентными полупроводниковыми наночастицами и органическими флуорофорами: проникновение и внутриклеточный транспорт

• Автор: Салова, Анна Владимировна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 97 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1. ВВЕДЕНИЕ
1.1. Актуальность проблемы
1.2. Цель и задачи исследования
1.3. Основные положения, выносимые на защиту
1.4. Научная новизна полученных результатов
1.5. Теоретическое и практическое значение работы
1.6. Апробация работы
1.7. Структура и объем диссертации
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Эндоцитоз
2.1.1. Типы эндоцитоза
2.1.2. Клатрин-зависимый рецептор-опосредованный эндоцитоз
(РОЭ)
2.1.3. Эндоцитоз ЭФР-рецепторных комплексов
2.1.3.1. ЭФР и его рецептор
2.1.3.2. Регуляция эндоцитоза ЭФР-рецепторных
комплексов
2.2. Квантовые точки
2.2.1. Синтез и свойства КТ
2.2.2. Функционализация КТ
2.2.3. Взаимодействие с клетками неспецифических (нетаргетных) КТ
2.2.4. Специфическое взаимодействие КТ с клетками
2.2.5. Цитотоксичность КТ
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Культивирование клеток
3.2. Квантовые точки
3.3. Флуоресцентные витальные красители
3.4. Ингибиторы

3.5. Иммунофлуоресцентное окрашивание клеток
3.6. Лазерная сканирующая конфокальная микроскопия
4. РЕЗУЛЬТАТЫ
4.1. Анализ проникновения в клетки инертных КТ (ПЭГ-КТ)
4.2. Исследование эндоцитоза ТАТ-КТ
4.3. Исследование эндоцитоза ЭФР-КТ
5. ОБСУЖДЕНИЕ
6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
7. ВЫВОДЫ
8. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ
ДИССЕРТАЦИИ
9. СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АО акридиновый оранжевый
АПК амфифильная полиакриловая кислота
КТ квантовые точки
МВЭ мультивезикулярные эндосомы
пэ поздние эндосомы
ПЭГ полиэтиленгликоль
пэи полиэтиленимин
РЭ ранние эндосомы
РОЭ рецептор-опосредованный эндоцитоз
ТОФО триоктилфосфин оксид
ФИ фосфатидилинозитол
ЭФР эпидермальный фактор роста
ASON антисмысловой олигонуклеотид к мРНК сюрвивина (anti-survivin antisense oligonucleotides)
ЕЕА1 антиген ранних эндосом (early endosome antigen 1)
ESCRT 0- -IV белковые эндосомные комплексы, участвующие в сортировке грузов из ранних в поздние эндосомы (endosomal sorting complex required for transport)
ЕгЬВ семейство тирозинкиназных рецепторов, к которому принадлежит рецептор ЭФР (ErbB 1, HER)
Lamp-1 гликопротеин лизосомной мембраны (lysosomal-associated membrane protein 1)
СРР пептид, проникающий в клетку (cell-penetrating peptide)
NGF фактор роста нервов (nerve growth factor)
ТАТ-пептид фрагмент ТАТ-белка вируса ВИЧ-

процессов возможна при использовании очень низких концентраций КТ (2 пМ). Показано, что эндосомы, содержащие ЭФР-КТ, сливаются между собой (Lidke et al., 2004).
Изучение эндоцитоза КТ-ЭФР-рецепторных комплексов: является
особенно важным, поскольку ЭФР играет ключевую’ роль в пролиферации
клеток. Как известно, уровень экспрессии рецептора ЭФР различен в
нормальных и опухолевых клетках, поэтому связывание ЭФР-КТ или КТ,
конъюгированных с антителами к рецептору ЭФР, с рецептором ЭФР служит
основой для использования этой системы в опытах in vivo. Янг с соавторами
показали, что КТ, конъюгированные с антителами к рецептору ЭФР,
специфически связываются и интернализуются экспрессирующими рецептор
ЭФР опухолевыми клетками (клетки опухоли молочной железы человека
MDA-MB-231 и мыши 4Т1, клетки опухоли поджелудочной железы человека
MIA РаСа-2). Необходимо отметить, что клетки MDA-MB-231 cells,
обладающие гиперэкспрессией рецептора ЭФР, поглощают КТ с антителами
в то время как MCF-7 (клетки опухоли молочной железы человека), которые
экспрессируют низкий уровень рецептора ЭФР, не поглощают такие КТ. Для
того, чтобы оценить адресную доставку КТ с антителами к рецептору ЭФР к
опухоли in vivo, вводили такие КТ в хвостовую вену мышам с привитой
опухолью поджелудочной железы человека (MIA РаСа-2). Показано, что КТ
с антителами к рецептору ЭФР накапливаются в большом количестве в
цитоплазме опухолевых клеток панкреатической железы и практически не
накапливаются в клетках печени и селезенки, в то время как неадресные КТ
(без антител) не обнаруживаются в опухоли и накапливаются в клетках
печени и селезенки (Yang et al., 2009). Анализ флуоресценции ЭФР-КТ в
клеточных культурах (клетки опухоли прямой кишки линий НСТ116 и DiFi,
которые имеют средний и высокий уровни экпрессии рецептора ЭФР,
соответственно, и клетки CFIO К1, которые не экспрессируют рецептор
ЭФР), в мыши, в отдельных ее органах и тканях показал преимущества КТ-
ЭФР для неинвазивного оптического выявления экспрессии рецептора ЭФР в
опухоли, трансплантированной мыши (Diagaradjane et al., 2008). Изучение