Исследование влияний обестатина и его фрагментов на функциональные характеристики крыс

• Автор: Хиразова, Елизавета Эдуардовна
• Шифр специальности: 03.03.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 177 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
I Ожирение как причина возникновения патологий
II Возможные механизмы возникновения ожирения
III Некоторые механизмы регуляции аппетита
IV Обестатин как возможный эндогенный регулятор аппетита и массы тела
V Вероятные пути действия обестатина
VI Обестатин и эндокринная система
VII Обестатин регулирует сон, память, поведенческую активность
VIII Обестатин и сердечнососудистая система
IX Обестатин как антиапоптотический и противовоспалительный фактор
X Обестатин, система антиоксидантной защиты и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая ось
ЧАСТЬ II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЧАСТЬ 111. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Глава I Исследование эффектов однократного введения обестатина
1.1 Исследование показателей первичного плазменного гемостаза и реологических свойств крови после добавления обестатина в различных дозах in vitro
1.2 Исследование показателей первичного плазменного гемостаза и осморезистентности эритроцитов после однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг in vivo
1.3 Оценка изменения массы тела, потребления пищи и питья в условиях ad libitum после однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг
1.4 Исследование поведенческой активности в тесте «Открытое поле» после однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг
1.5. Регистрация поведенческой активности в тесте «Приподнятый крестообразный лабиринт» после однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/к
1.6. Регистрация порога болевой чувствительности в тесте «Tail flick» (Реакция отдергивание хвоста) после однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг
1.7. Оценка вегетативного баланса регуляции по показателям вариабельности сердечного ритма после однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/к
Глава II Исследование эффектов однократного интраназального введения
фрагментов обестатина
2.1. Оценка изменения массы тела, потребления пищи и питья в условиях ad libitum после однократного интраназального введения фрагментов обестатина в дозе 300 нмоль/кг
2.2. Анализ поведенческой активности в тесте «Открытое поле» после однократного интраназального введения фрагментов обестатина в дозе 300 нмоль/кг
2.3. Регистрация поведенческой активности в тесте «Приподнятый крестообразный лабиринт» после однократного интраназального введения фрагментов обестатина в дозе 300 нмоль/кг
2.4. Регистрация порога болевой чувствительности в тесте «Tail flick» (Реакция отдергивание хвоста) после однократного интраназального введения фрагментов обестатина в дозе 300 нмоль/кг
2.5. Оценка вегетативного баланса регуляции по показателям вариабельности сердечного ритма после однократного введения фрагментов обестатина в дозе 300 нмоль/кг
Глава III Исследование эффектов хронического введения обестатина и его
фрагментов 1-4
3.1. Оценка изменения массы тела, потребления пищи и питья в условиях ad libitum после хронического введения обестатина и его фрагментов 1-4, 16-23 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней
3.2. Регистрация поведенческой активности в тесте «Открытое поле» после хронического введения обестатина и его фрагментов 1-4, 16-23 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней
3.3. Регистрация поведенческой активности в тесте «Приподнятый крестообразный лабиринт» после хронического введения обестатина и его фрагментов 1-4, 16-23 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней
3.4. Регистрация порога болевой чувствительности в тесте «Tail flick» (Реакция отдергивание хвоста) после хронического введения обестатина и его фрагментов 1 -4, 16-23 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней
3.5. Оценка вегетативного баланса регуляции по показателям вариабельности сердечного ритма после хронического введения обестатина и его фрагментов 1-4, 16-23 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней
Глава IV. Оценка уровня глюкозы в крови, функционального состояния системы
АОЗ и уровня кортикостерона в плазме крови после однократного и
хронического введения обестатина и фрагмента 1-4 в дозе 300 нмоль/кг
4.1. Исследование содержания глюкозы в крови после однократного и хронического введения обестатина и его фрагмента 1-4 в дозе 300 нмоль/кг
4.2. Исследование функционального состояния системы антиоксидантной защиты и уровня кортикостерона в плазме крови после однократного и хронического введения обестатина и его фрагмента 1 -4 в дозе 300 нмоль/кг
Г лава V Исследование эффектов хронического введения обестатина и его
фрагмента 1 -4 на модели ожирения
5.1. Оценка изменения массы тела, потребления пищи и воды после хронического введения обестатина или его фрагмента 1-4 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней у крыс с повышенной массой тела, содержащихся на высококалорийной диете в условиях ad libitum
5.2. Оценка изменения массы тела, потребления пищи и питья после хронического введения обестатина или его фрагмента 1-4 в дозе 300 нмоль/кг в течение 5 дней у крыс с повышенной массой тела, переведенных на сбалансированное питание, в условиях ad libitum

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Лабораторные животные
Работа выполнялась на самцах крыс линии Вистар средней массой 200 -300г. (п=400). Все исследования проводились в соответствии с этическими принципами и нормативными документами, рекомендованными Европейским научным фондом (ESF) и Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным.
2. Используемые в работе препараты
В экспериментах использовали обестатин крыс
(FNAPFDVGIKLSGAQYQQEIGRAL-NEE), фрагменты обестатина 1-4 (FNAP-NH2), 5-10 (FDVGIK-NFE), 10-15 (KLSGAQ-NH2), 11-23 (LSGAQYQQHGRAL-NH2) и 16-23 (YQQHGRAL-NF12), синтезированные в лаборатории пептидного синтеза химического факультета СПбГУ под руководством проф. М. И. Титова и в ФГУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Министерства здравоохранения и социального развития РФ в лаборатории синтеза пептидов под руководством Ж.Д. Беспаловой. Разведение препаратов осуществляли добавлением 0,85 % раствора хлорида натрия.
3. Введение веществ
В первой части работы проводили исследование влияния различных концентраций обестатина (1,5, 4,5, 7,5, 12 и 15 нмоль/мл пептида в конечной пробе, что соответствует дозам 100, 300, 500, 800, 1000 нмоль/кг живого веса в экспериментах in vivo) на показатели плазменного гемостаза и реологические свойства крови in vitro. Данные дозы были выбраны исходя из литературных данных, поскольку именно в этом диапазоне доз регистрировали выраженное анорексигенное действие вещества в большинстве случаев (Gourcerol et al., 2007; Lagaud et al., 2007; Lacquaniti et al., 2011).
Доза, оказавшая наименьшее количество негативных эффектов на регистрируемые показатели, была выбрана для дальнейшего изучения в экспериментах in vivo.