Генетические дефекты и полиморфизм гена каппа-казеина у племенного молочного скота

• Автор: Никифорова, Екатерина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 111 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика основных продуктивных показателей молочного
скота Ленинградской области
1.2. Обзор молекулярно-генетических маркеров, используемых в селекции
1.3. Преимущества полимеразной цепной реакции в сравнении
с другими методами анализа
1.4. История выявления вредных рецессивных мутаций у крупного рогатого скота
1.5. Использование полимеразной цепной реакции в выявлении
мутаций BLAD, CVM и DUMS у крупного рогатого скот
1.6. Использование полимеразной цепной реакции в выявлении аллельных вариантов гена каппа-казеина
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Выделение и определение качества ДИК из проб крови
2.2. Оптимизация процедуры полимеразной цепной реакции для выявления рецессивных мутаций и аллелей гена каппа-казеина
2.3. Проведение полимеразной цепной реакции для выявления рецессивных мутаций BLAD, CVM и DUMPS
2.4. Проведение полимеразной цепной реакции для выявления
генотипов по гену каппа-казеина
2.5. Анализ фрагментов ДНК в агарозном геле

2.6. Статистическая обработка данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
ЗЛ. Встречаемость мутации BLAD и СУМ в различных хозяйствах
Ленинградской области
3.2. Типы гена каппа-казеина и их частота встречаемости у коров Ленинградской области
3.3. Связь генотипов гена каппа-казеина и продуктивных качеств коров 79 ВЫВОДЫ
ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ТЕРМИНОВ И УСЛОВНЫХ
ОБОЗНАЧЕНИЙ
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов ДНК БДБ - додецилсульфат натрия ЭДТА - этилендиаминтетраацетат SNP - однонуклеотидный полиморфизм
RAPD - полиморфизм ДНК, выявляемый случайными праймерами
BLAD - дефицит адгезивности лейкоцитов
CVM - комплексное уродство позвоночника
DUMPS - дефицит фермента уридинмонофосфатсинтетазы
у2 - критерий Пирсона соответствия наблюдаемой частоте встречаемости генотипа в популяции теоретически ожидаемой частоте
мМ, рМ - миллимолярная и микромолярная концентрация, соответственно
Праймер - олигонуклеотид, служащий затравкой в ПЦР
Олигонуклеотид - короткая последовательность дезоксинуклеотидов одноцепочечной ДНК
Полимеразная цепная реакция - молекулярно-генетический метод, позволяющий многократно амплифицировать изучаемый участок ДНК
Генотипирование - молекулярно-генетические методы, позволяющие выявит различия между индивидами на уровне генов или ДНК
Ферменты рестрикции - ферменты, расщепляющие ДНК в строго определенных участках, позволяющие выявить однонуклеотидные полиморфизмы в этих участках.

к такому же выводу приходит и другой исследователь, который показал, что аллель «В» связан с повышенной молочной продуктивностью как у первотелок, так и у коров по 2-й и 3-й лактациям (Грашин, 2011). Суммируя сказанное выше, можно прийти к выводу, что к настоящему времени нет однозначного понимания, как аллели «А» и «В» каппа-казеина влияют на признаки количества и качества молока у крупного рогатого скота. Возможно, их связь с признаками молочной продуктивности зависит от исследуемой популяции независимо от породы животных. Очевидно, признак «молочная продуктивность» определяется большим числом генов и в разных популяциях закономерности могут быть разными в силу наличия комбинаций генов и их взаимодействия.
Разработано достаточно много тест-систем для выявления полиморфных вариантов гена каппа-казеина (Глазко с соавт., 1997; Дерюшева, 1993; Кириленко с соавт., 1995; Сулимова с соавт., 1991). Авторы используют различные комбинации праймеров для амплификации участка, содержащего однонуклеотидные замены. Например, амплификат длиной 935 пар оснований образуется при использовании следующих праймеров (Soria et al., 2003): карра-casein Forward Primer : 5’-AGCGCTGTGAGAAAGATG-3’ карра-casein Reverse Primer : 5’-GTGCAACAACACTGGTAT-3’
Использование эндонуклеазы рестрикции Hinàlll позволяет выявить у гомозигот «АА» один фрагмент 935 пар оснований, у гетерозигот «АВ» - три фрагмента 935, 520 и 415 пар оснований, у гомозигот «ВВ» - два фрагмента 520 и 415 пар сонований. Рестриктаза Нае III не различает гомозиготы и гетерозиготы, однако идентифицирует редкую аллель «Е» в гене каппа-казеина (Soria et al., 2003).