Сенсорные системы инфузорий Tetrahymena pyriformis в биотестировании экотоксикантов и биологически активных веществ

• Автор: Шемарова, Ирина Владимировна
• Шифр специальности: 03.01.06
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 251 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Биотестирование и его значение в контроле окружающей среды и качества продукции
1.2. Тест-объекты в биотестировании
1.3. Сенсорные системы микроорганизмов как воспринимающий элемент тест-системы 3
1.4. Перспективы использования одноклеточных микроорганизмов в биотестировании
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.2. Основные питательные среды и растворы в культивировании
Т. руп/огт1я СЬ '
2.3. Культивирование Т. руп]Ъгти СГ
2.4. Оценка качества культуры Т. руг'^огтЬ СЬ
2.5. Морфологическая оценка клеток Т. руг'^огт’м СЬ, находящихся на разных стадиях клеточного цикла. Синхронизация культуры.
Определение ИКД
2.6. Метод проведения функционального биотеста
2.7. Метод определения активности глутатион-Б-трансферазы
2.8. Методы определения продуктов перекисного
окисления липидов
2.9. Метод определения интенсивности клеточного дыхания
2.10. Метод субстратно-ингибиторного анализа
спектра холинэстераз. Электрофорез в ПААГ

2.11. Метод определения активности аминооксидазы
2.12. Метод определения активности аденилатциклазы
2.13. Гистохимические методы определения содержания в клетках ДНК, РНК и белков
2.14. Определение рецепторов тирозинкиназного типа
2.15. Методика определения изометрического мышечного сокращения
in situ
2.16. Определение электрической активности сердца лягушки. Метод компьютерной регистрации ЭКГ
2.17. Методика биотестирования по реакциям гибели и снижения прироста культуры клеток Т. pyriformis GL
Глава 3. ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ НА НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ ОДНОКЛЕТОЧНЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
3.1. Изучение общей токсичности Cd2+, Cu2+,Zn2+ и №2+на популяции свободноживущих инфузорий и растительных жгутиконосцев
3.2. Сравнительное исследование токсичности соединений Cd2+ в свободной и хелатированной формах для Т. pyriformis GL
3.3. Действие соединений Cd2+ в свободной и хелатированной формах на фагоцитарную активность Т. pyriformis GL
3.4. Действие соединений Cd2+ в свободной и хелатированной формах на активность глутатион-Б-трансферазы Т. pyriformis GL
3.5. Сравнение результатов определения токсичности Cd2+ на тетрахименах методом биотестирования с результатами, полученными на миокардиальных препаратах лягушки Rana temporaria
3.6. Сравнение результатов определения токсичности Cd2+ на тетрахименах методом биотестирования с результатами, полученными на митохондриальных препаратах крысы

ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ВЕЩЕСТВ, ОБЛАДАЮЩИХ ГЕРБИЦИДНОЙ АКТИВНОСТЬЮ, НА Т. PYRIFORMIS GL И Р. СAUDATUM
4.1. Изучение токсичности ПК, ее производных и синтетических комплексонов (ЭДТА и МЭАДУК)
4.2. Изучение действия ПК на активность глутатион-Б-трансферазы
4.3. Изучение действия ПК на процессы ПОЛ, клеточное дыхание и металлозависимые ферменты
ГЛАВА 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ МИТОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ Т. PYRIFORMIS GL
5.1. Изучение действия EGF на рост культуры Т. pyriformis GL
5.2. Изучение действия EGF на синтез ДНК в Т. pyriformis GL
5.3. Действие инсулина и инсулина в сочетании с EGF на рост культуры Т. pyriformis GL
5.4. Изучение действия инсулина и инсулина в сочетании с EGF на синтез ДНК в Т. pyriformis GL
5.5. Действие ацетилхолина на рост культуры Т. pyriformis GL
5.6. Спектр эстераз в клетках Т. pyriformis GL
5.7. Действие серотонина на рост культуры Т. pyriformis GL
5.8. Субстратная специфичность и каталитическая активность
аминооксидаз из Т. pyriformis GL и М. barkeri
ГЛАВА 6. ЦИТОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
СИГНАЛЬНЫХ СИСТЕМ Т. PYRIFORMIS GL
6.1. Изучение влияния EGF на синтез РНК и общего белка в
Т. pyriformis GL
6.2. Изучение влияния EGF на активность аденилатциклазы
6.3. Влияние блокаторов тирозинкиназ на синтез ДНК
6.4. Влияние блокаторов Са2+-каналов и MAP-киназ на синтез ДНК
6.5. Влияние блокаторов PLC и РКС на синтез ДНК

геронтологического действия (Игнатьев и др., 1980; Максимкж, Телишевская, 1998). Тетрахимены проявляют высокую чувствительность к веществам, мигрирующим из полимерных материалов, среди которых имеются тератогенные и канцерогенные. При оценке тератогенных свойств полимеров определяют число видоизмененных, уродливых форм инфузории; канцерогенных свойств - по изменению размеров макронуклеуса и некоторым другим цитохимическим показателям (Лагунина и др., 1998). Эти исследования показывают перспективность использования инфузории Те^акутепа руг '^огтк в качестве тест-объекта и в лекарственной токсикологии.
Однако, несмотря на определенный положительный опыт использования инфузорий в биотестировании токсических веществ, их применение для оценки биологической активности лекарственных препаратов сопряжено с определенными трудностями, что офаничивает использование данных микроорганизмов в скрининговых исследованиях. Прежде всего, это относится к неоднозначности оценки и интерпретации полученных в эксперименте результатов. Анализ наиболее широко применяемых методов биотестирования токсических веществ с использованием инфузорий показал, что токсичность веществ устанавливается преимущественно по изменению численности клеток. При этом не учитывается, что в таких, как правило, длительных экспериментах в клетках формируется комплекс компенсаторно-приспособительных реакций. В связи с этим при оценке реакций инфузорий на внешнее воздействие необходимо разделять первичные ответные реакции от длительных, включающих комплекс адаптивных изменений со стороны многих функциональных систем клетки. Можно полагать, что раздельная оценка этих изменений позволит корректно интерпретировать полученные методами бяотестирования результаты (Шемарова, 2008).