Биотехнологические аспекты разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий рода Providencia

• Автор: Барт, Наталья Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Ульяновск
• Количество страниц: 146 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Список условных сокращений
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. История открытия и токсономическая характеристика
бактерий рода Providencia
1.2. Биологические свойства бактерий рода Ргоу1с1епс{а
1.2.1. Морфология
1.2.2. Культуральные свойства
1.2.3. Биохимические свойства
1.2.4. Антигенная структура и серологическая идентификация
1.2.5. Патогенность
1.2.6. Резервуар и распространение инфекционного агента
1.2.7. Устойчивость к физико-химическим факторам
1.3. Лабораторная идентификация бактерий рода Providencia
1.4. Бактериофаги и их применение в лабораторной практике
1.4.1. Взаимодействие бактериофагов с клеткой-хозяином
1.4.2. Фагоидентификация бактерий и фаготипирование
1.4.3. Реакция нарастания титра фага (РНФ)
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект, материалы и методы
2.1.1. Материалы
2.1.1. Методы
2.2. Результаты собственных исследований
2.2.1. Выделение бактерий рода Providencia из объектов ветеринарного надзора и патологического материала
2.2.2. Выделение бактериофагов Providencia
и селекция клонов фагов
2.2.3. Характеристика фагов бактерий рода Providencia
2.2.3.1. Морфология негативных колоний
2.2.3.2. Литическая активность бактериофагов Providencia
2.2.3.3. Спектр литической активности бактериофагов Providencia
2.2.3.4. Специфичность действия бактериофагов рода Providencia
2.2.3.5. Температурная устойчивость бактериофагов
рода Ргоу1с1епс1а
2.2.3.6. Устойчивость бактериофагов рода Ргоу1с1епЫа
к воздействию хлороформа
2.3. Разработка технологических параметров изготовления и контроля
индикаторных фагов Ргом1(1епйа
2.4. Разработка схемы ускоренной идентификации бактерий рода
Ргоу1с1еп&а
2.5. Разработка оптимальных условий постановки РНФ
2.5.1. Определение количественного показателя РНФ,
имеющего диагностическое значение
2.5.2. Установление оптимального времени, обеспечивающее наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями
2.5.3. Разработка схемы постановки РНФ для индикации
бактерий рода Ргоу1с1епЫа в объектах ветеринарного надзора
2.5.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной бактериями рода Ргоугс!епЫа с помощью РНФ
2.5.3.2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями рода Ргоу!с1епс1а с помощью РНФ
2.5.3.3. Исследование фекалий, контаминированных бактериями
рода Ргоу(с1епс1а с помощью РНФ
2.5.3.4. Исследование мяса, контаминированного бактериями
рода Providencia с помощью РНФ
2.5.3.5. Исследование фекалий больных диареей телят на присутствие бактерий Providencia с использованием РНФ
Заключение
Выводы
Практические предложения
Список использованных литературных источников
Приложения

Список условных сокращений
ВСЭ - ветеринарно-санитарная экспертиза,
ДДС - дифференциально-диагностическая среда, ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота, м.к. - микробная клетка,
м.к./мл - количество микробных клеток в 1 мл, м.к./г - количество микробных клеток в 1 г, мкм - микрометр,
МПА - мясопептонный агар,
МПБ - мясопептонный бульон,
НПО - научно-производственное объединение, РНФ - реакция нарастания титра фага,
ИФА - иммуноферментный анализ,
РИА - радиоиммунный анализ,
ПЦР - полимеразная цепная реакция,
УГСХА - Ульяновская государственная академия
сельскохозяйственная

определенно с сильной реакцией обозначаются в виде заглавных букв, следовательно, со слабой реакцией - в виде строчных букв.
В.А. Килессо (1960) применяла сальмонеллезный О-фаг, лизирующий 40 различных серотипов сальмонелл и некоторые штаммы шигелл.
Т. Квелашвили с соавт. (2005) успешно занимаются фаготипированием клинических штаммов Pseudomonas aeruginosa.
Бактерии рода Providencia бактериофаги этого рода энтеробактерий относятся к недостаточно изученным биологическим объектам.
Имеется сообщение И.М.Габриловича с соавт. (1998) о выделении семи фагов из лизогенных штаммов P.rettgeri, изолированных из патологического материала от больных людей. Негативные колонии были прозрачными диаметром 1-2 мм. Два штамма фагов имели одинаковую морфологи. И состояли из гексагональной головки и длинного отростка без сокращающегося чехлика. Диаметр головки равен 38-48 нм, длина грани головки - 20-28 нм, длина отростка - 90-133 нм, ширина - 0,5-0,7 нм. То есть они принадлежали к семейству Syphyoviridae, морфологической группы В1. Остальные 5 фагов отличались крупными удлиненными головками длиной до 72 нм и коротким отростком до 12-14 нм. Эти фаги были отнесены авторами к семейству Prodoviridae, морфологической группе С 2.
При 55° С фаги практически не инактивировались и лишь при 30 минутной экспозиции титр некоторых из них снижался на 13-20%. Фаги также были устойчивы к воздействию хлороформа в отношении 1:10 при 30 минутной экспозиции.
Фаготип является тонким маркером, поскольку, определение фаготипа маркирует штамм сразу по нескольким меткам в строго определенном сочетании. В этом заключается значимость фаготипирования как метода.
Первыми кто в ветеринарной практике применили фаготипирование, были П.И. Архангельский, Б.А. Степанов (1966), А.И. Ивашура (1967), Л.И. Петрушина (1967), Б.А. Байрак (1970), Н.М. Никитюк (1970), Т.А. Давиденко, А.М. Зарицкий (1972). В своих исследованиях они указывают на