+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Биохимические аспекты формирования барьерного фенотипа эндотелиоцитов человека при совместном культивировании с аллогенными астроцитами

  • Автор:

    Волгина, Надежда Евгеньевна

  • Шифр специальности:

    03.01.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2013

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    101 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

Содержание
Список сокращений
Актуальность
Глава I. Обзор литературы: модели ГЭБ как инструмент в исследованиях барьера in vitro
Введение
Особенности соединений эндотелиальных клеток
Адгезивные контакты
Плотные контакты
Молекулы адгезии контактов (JAM)
Регуляция плотных контактов
Т ранспортеры
Роль астроцитов и перицитов в формировании барьера
Моделирование ГЭБ in vitro
Эволюция моделей ГЭБ
Монокультуры
Двумерные модели
Динамические модели
Метод компьютерного моделирования
Типология эндотелиальных клеток
Влияние экзогенных факторов
Параметры оценки барьерного фенотипа эндотелиальных клеток
Заключение
Глава TI. Материалы и методы исследования
Получение первичной культуры HUVEC
Подготовка субстрата для культивирования эндотелиальных клеток
Совместное культивирование с астроцитами и с добавлением производного цАМФ
Фиксация и окрашивание клеток на культуральных вкладышах Transwell
Измерение трансэндотелиального сопротивления
Измерение проницаемости
Иммуноцитохимический анализ
Лизаты клеток культуры HUVEC
Диск-электрофорез белков в ДДС-ПААГ
Иммуноблоттинг
Очистка и выделение РНК
Постановка ПЦР

Цитотоксичность
Высокоэффективная жидкостная хромотография
Компьютерное моделирование
Определение активности эффлюксного транспортера в культуре НОУ ЕС
Статистический анализ
Глава III. Результаты и обсуждения
Культивирование клеток и иммуноцитохимическая верификация
Совместное культивирование эндотелиоцитов и астроцитов
Анализ экспрессии белков плотных контактов
Анализ экспрессии белков адгезивных контактов
Измерение проницаемости и трансэндотелиального сопротивления
Оценка влияния воспалительных медиаторов
Измерение проницаемости для физиологически активных веществ
Оценка активности обратного транспорта
Глава IV. Заключение
Выводы
Список литературы

Список сокращений
Сх43 - коннексин 43 TJ — плотные контакты
VE-cadherin - васкулярно-эндотелиальный кадгерин N-cadherin - нейрональный кадгерин
РЕСАМ-1 - гликопротеин, относящийся к классу молекул клеточной адгезии (platelet endothelial cell adhesion molecule 1)
VEGF - фактор роста эндотелия сосудов А
VEGFR-1 (Flt-1) - рецептор 1 типа фактора роста эндотелия сосудов VEGFR-2 (KDR) - рецептор 2 типа фактора роста эндотелия сосудов JAM - молекулы адгезивных контактов
JACOP - биспиральный белок, связанный с межклеточными контактами (junction-associated coil-coiled protein)
G-белки - семейство белков, относящееся к ГТФазам
FIU VEC - культура эндотелиальных клеткок вены пуповины человека
MDCK - культура эндотелиальных клеток из почки собаки (Madine Darby Canine
Kidney)
Glut-1 - транспортер глюкозы клеток млекопитающих
P-gp - Р - гликопротеин
TGF - трансформирующий ростовой фактор
GDNF - фактор роста из клеток глии
bFCF - щелочной фактор роста фибробластов
PDGF - тромбицитарный фактор роста
ANG-1 - ангиопоэтин-
ECGS - добавка для роста эндотелиальных клеток, содержащая экстракт из ткани мозга быка
сАМР - циклический аденозин монофосфат TEER - трансэндотелиальное сопротивление
ECIS - электрический сенсор комплексного сопротивления (Electric Cell-substrate Impedance Sensing)
DAPI - флуоресцентный ядерный краситель 4',6-diamidino-2-phenylindole
Dil - флуоресцентный краситель 1,1’-октадецил 3,3,3’
тетраметилиндокарбоцианин перхлорат
Dil - Ас - LDL — меченый красителем Dil ацетилированный липопротеин низкой плотности
GFAP - глиофибриллярный кислый протеин

Глава II. Материалы и методы исследования
Получение первичной культуры HUVEC
Для получения первичных культур эндотелиоцитов из вены пуповины человека использовали модификацию методики, описанной Eric A. Jaffe [40] .
Биологический материал получали из акушерской клиники в соответствии с этическими нормами, с согласия рожениц. Полость вены промывали DPBS (Invitrogen) до полного удаления крови, заполняли 0,2% раствором коллагеназы в DPBS и подвергали ферментативной диссоциации. Пуповину переносили в стакан с DPBS, содержащим 0,9гпМ СаСЬ, 0,493 mM MgCh, 5,56 mM глюкозу, 0,327 шМ пируват натрия и инкубировали при 37°С 20 минут. После инкубации раствор коллагеназы, содержащий клетки собирали в пробирку 50 мл; оставшуюся коллагеназу собирали перфузией вены 20 мл среды 199 (Invitrogen). К собранному элюату добавляли среду 199 с 10% эмбриональной сыворотки теленка (FBS) и центрифугировали 10 минут при 250 g. Супернатант удаляли, осадок клеток суспендировали в DMEM/F12 (Invitrogen), содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS), 2шМ L-глютамина, 20 ng/мл bFGF (Sigma), 120 мкг/мл гепарина, ростовую добавку для роста эндотелиальных клеток больших сосудов - LSGS (Invitrogen), 100 ед/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Клетки культивировали в культуральных пластиковых флаконах, 25 см2 (Coming-Costar) при 37°С во влажной атмосфере с 5% СО2. Культуры пассировали с использованием раствора трипсин (0,02%) -ЭДТА (0,01%). Чистоту культур оценивали по типичной для эндотелиальных клеток морфологии (cobblestone) с помощью фазово -контрастной микроскопии, экспрессии антигена вон Виллебрандта (fvW) и захвату липопротеина Dil-Ac-LDL.
Выделение астроцитов из неонатального мозга
Работа выполнялась на абортивном материале, все операции вплоть до ферментативной диссоциации проводились на холоду в стерильных условиях с использованием среды и буфера, содержащих антибиотик.
Применяли адаптированную нами методику, описанную David Weinstein [ 182].
Осторожным скольжением закрытых ножниц вдоль черепа производили скальпирование, освобождались от кожных покровов. При максимальном угловом наклоне лезвий ножниц разрезали череп по обеим сторонам от его основания до венечного шва, достигнув положения которого, производили поперечный разрез, избавляясь тем самым от переднего отдела мозга. Далее отделяли мозжечок от прилежащих затылочных долей полушарий головного мозга и переносили его в чистую чашку Петри с небольшим количеством буфера PBS с добавлением глюкозы. Удаление мозговых оболочек

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.136, запросов: 967