+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Характеристика интегразы пенообразующего вируса и оценка возможности ее использования для направленной интеграции ДНК

  • Автор:

    Княжанская, Екатерина Сергеевна

  • Шифр специальности:

    03.01.03

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2011

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    140 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1 ВВЕДЕНИЕ
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Подходы к направленной интеграции ДНК на основе транспозаз и ретровирусных интеграз
2.1.1 Системы направленной интеграции на основе ретровирусов
2.1.1.1 Этапы интеграции ДНК ретровирусов
2.1.1.2 Интеграционные предпочтения ретровирусов
2.1.1.3 Походы к направленной интеграции на основе ретровирусных интеграз
или их кофакторов
2.1.1.3.1 Методы определения специфичности интеграции в модельной системе in vitro
2.1.1.3.2 Методы определения специфичности интеграции в клеточный геном
2.1.1.3.3 Гибриды на основе интеграз и природных ДНК-связывающих белков
2.1.1.3.4 Гибриды на основе синтетических белков «цинковые пальцы»
2.1.2 Системы направленной интеграции на основе транспозаз
2.1.2.1 Интерплазмидный анализ
2.1.2.2 Модификация транспозазы
2.1.2.3 Модификация транспозона
2.1.2.4 Модификация белка, связывающего транспозазу
2.1.3 Заключение
2.2 Пенообразующие вирусы: особенности строения и репликации
2.2.1 Клеточный тропизм
2.2.2 Клеточная специфичность репликации
2.2.3 Роль иммунной системы в развитии спумавирусной инфекции
2.2.4 Строение генома
2.2.4.1 Ядерный экспорт вирусных мРНК
2.2.4.2 Капсидные белки (Gag) спумавирусов
2.2.4.3 Ферменты (Pol) спумавирусов
2.2.4.4 Белки оболочки (Env) спумавирусов
2.2.5 Векторы на основе спумавирусов
2.2.6 Заключение
3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1 Характеристика каталитической активности ИН PFV
3.1.1 Характеристика ДНК-связывающей активности ИН PF V
3.1.2 Исследование каталитической активности ИН PFV

3.1.2.1 Активность ИН PFV в реакции 3’-процессинга и гомологичного переноса
цепи
3.1.2.2 Определение начальной скорости реакции З’-процессинга для ИН PFV
3.1.2.3 Активность ИН PFV в реакции гетерологичного переноса цепи
3.2 Изучение особенностей взаимодействия интегразы PFV с концевым участком U5 субстрата
3.2.1 Исследование влияния 2’-пропандиольной модификации на начальную
скорость реакции З’-процессинга ИН PFV
3.2.2 Эффективность образования ковалентных комплексов между
модифицированными аналогами U5pfv субстрата и ИН PFV
3.2.3 Сближенность модифицированных положений в составе U5pfv с остатками
лизина в структуре ИН PFV по данным рентгено-структурного анализа
3.3 Влияние олигонуклеотидных ингибиторов З’-процессинга на активность интегразы PFV
3.4 Система направленной интеграции на основе ИН PFV и ИН ВИЧ
3.4.1 Выбор сайта направленной интеграции в геноме человека
3.4.2 Дизайн белка, состоящего из доменов «цинковые пальцы» и способного
связывать последовательность trg
3.4.3 Синтез гена trll8
3.4.3.1 Первый подход к синтезу гена trll8
3.4.3.1.1 Одновременная сборка и лигирование всех фрагментов гена tri
3.4.3.1.2 Поочередное лигирование фрагментов гена trll8
3.4.3.2 Второй подход к синтезу гена trll
3.4.3.2.1 Сборка фрагментов А, В и С
3.4.3.2.2 Сборка фрагментов В и С
3.4.3.2.3 Сборка полноразмерного гена trll8
3.4.3.2.4 Сайт направленный мутагенез для исправления точечных мутаций,
содержащихся в синтезированной копии гена trll8
3.4.4 Получение генетических конструкций для экспрессии белка tRLl 8, а также
для получения гибридных белков с интегразой PFV и ВИЧ
3.4.4.1 Получение конструкции для экспрессии белка tRL18
3.4.4.2 Получение конструкций для экспрессии гибридных белков
3.4.5 Выделение белка tRLl 8, а также гибридных белков на его основе
3.4.6 Анализ белка tRLl 8, а также гибридных белков tRLl 8-INhlv, tRLl 8-INpfv, INhlv-
tRL18 и INp 3.4.6.1 Характеристика белка tRL18 методом кругового дихроизма
3.4.6.2 ДНК-связывающая активность белка tRL18
3.4.6.3 ДНК-связывающая активность гибридных белков tRLl8-INh,v, tRLl8-
INPpiv, INhiv-tRL18 и INpiV-tRL18
3.4.6.4 Каталитическая активность гибридных белков tRL18-lNhlv, tRL18-INpfv,
INhiv-tRL18 и INpfv-tRLl
3.4.6.5 Активность гибридных белков при переносе цепи в плазмидный вектор
3.4.6.6 Влияние соединения 11-ДНК на активность гибридных белков в реакции
гетерологического переноса цепи
3.4.7 Анализ распределения интеграции, катализируемой гибридными белками
3.4.7.1 Получение конструкции pbr322trg
3.4.7.2 Схема эксперимента по оценке направленности интеграции
3.4.7.3 Оценка направленности интеграции гибридными белками в вектор
pbr322,rg
3.4.7.4 Определение точного положения «горячих точек» интеграции для
гибрида ИНР
4 МАТЕРИАЛЫ И ОБОРУДОВАНИЕ
4.1 Реактивы
4.2 Ферменты
4.3 Наборы реагентов
4.4 Бактериальные плазмиды и штаммы
4.5 Олигодезоксирибонуклеотиды
4.5.1 Немодифицированные олигонуклеотиды
4.5.2 Модифицированные олигонуклеотиды
4.6 Буферные растворы
4.7 Оборудование
4.8 Методы
4.8.1 Изучение связывания белков с ДНК
4.8.1.1 Приготовление субстрата интегразы U5B/U5A
4.8.1.2 Связывание ДНК-дуплексов с интегразой
4.8.1.3 Связывание «цинкового пальца» с последовательностью-мишенью
4.8.1.4 Расчет константы диссоциации в системе белок
4.8.2 Реакция З’-концевого процессинга
4.8.3 Реакция гомологичного переноса цепи
4.8.4 Реакция гетерологичного переноса цепи (интеграция в плазмиду)
4.8.5 Проведение ковалентного присоединения модифицированного ДНК-
субстрата к ИН
4.8.5.1 Окисление
4.8.5.2 Изучение зависимости выхода ковалентно связанного комплекса от
положения модификации:
4.8.6 Синтез длинных фрагментов ДНК методом лигирования отдельных
олигонуклеотидов

цитотоксичность спумавируса не наносит хозяину значительного ущерба. Активная репликация СВ в ротовой полости согласуется и с предполагаемым путем передачи вируса через слюну при укусе.

U-Jdcftrtf]
aynifci
* iWpwf';'v4 aynfh*»!*
Hepadtiavlnis lit* cycl*
Рисунок 5. Цикл репликации спумавирусов по сравнению с орторетровирусами и гепаднавирусами. А. Цикл репликации спумавирусов. Красным отмечена вирусная РНК, синим - ДНК. Желтым выделены вирусные Gag белки, зеленым - гликопротеины, серым - полисомы. ER - эндоллазматический ретикулум. Знаки вопроса обозначают неизвестные этапы жизненного цикла. Б. Цикл репликации орторетровирусов. Незрелые вирусные частицы отмечены желтым цветом по центру. Зрелые внеклеточные вирусные частицы отмечены белым цветом по центру. С. Цикл репликации гепаднавирусов[125]

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.096, запросов: 967